大鼠糖尿病腎臟病理改變以及羅格列酮對其病理改善的研究.pdf

1、據(jù)統(tǒng)計我國糖尿病患病率已超過總?cè)丝诘?.5％。糖尿病腎病(DN)是糖尿病最嚴(yán)重的微血管并發(fā)癥之一,糖尿病腎病引發(fā)的終末期腎功能衰竭(ESRD)正在成為威脅糖尿病患者生命的主要原因。據(jù)美國2000年統(tǒng)計,每年新增ESRD患者中由DN引發(fā)的已近50%。近幾年我國經(jīng)濟(jì)較發(fā)達(dá)地區(qū)統(tǒng)計資料也發(fā)現(xiàn)DN所致ESRD的比例達(dá)15%左右。因此有效控制DN的進(jìn)展是當(dāng)前臨床治療學(xué)上重要課題。DN病理特征主要包括腎小球基底膜增厚和系膜區(qū)細(xì)胞外基質(zhì)沉積(extr

2、acellular matrix,ECM)。羅格列酮作為胰島素增敏劑,通過結(jié)合并激動過氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisome proliferator-activated recptors,PPARs),其中主要是通過激活過氧化物酶體增生物激活受體gamma(peroxisome proliferator activated receptorsgamma:PPARgamma),在降血糖、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝,抗炎,抑制細(xì)胞生長因子、降血

3、壓、降低尿白蛋白方面起到重要作用。過氧化物酶體增生物激活受體gamma(peroxisomeproliferator activated receptors gamma:PPARgamma)是新近發(fā)現(xiàn)的血管病理改變的靶目標(biāo)物質(zhì),它通過調(diào)節(jié)基因表達(dá)對細(xì)胞外刺激作出應(yīng)答。
　　研究目的1.分析糖尿病大鼠腎臟病理形態(tài)改變情況。2.了解羅格列酮對糖尿病大鼠腎臟病理形態(tài)的影響。
　　實驗材料和方法一.建立糖尿病動物模型1.購置30只1

4、0周齡Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠,平均體重315±30.06g,平均血糖96±4.86 mg/L。2.全部SD大鼠在清潔級條件下飼養(yǎng),室內(nèi)溫度為15～25℃,12小時光亮,12小時黑暗,食物與飲水能自由得到。3.糖尿病模型建立后第2天起,其中的10只大鼠用PPARgamm配體代表物:羅格列酮(rosiglitazone R)1mg/kg/day生理鹽水溶解后灌胃。糖尿病大鼠每天測尿糖一次,每周測血糖一次,使糖尿病大鼠模

5、型的血糖在250～500 mg/L之間。4.大鼠處理:模型建立后10周,大鼠以氯胺酮針35mg/kg和苯巴比妥針50mg/kg腹腔內(nèi)注射麻醉,用快速法血糖測定儀(美國羅氏公司Adantage)測血糖。5.統(tǒng)計學(xué)處理:數(shù)據(jù)用平均值X±標(biāo)準(zhǔn)差S表示,采用多組方差分析SPSS11.5 forwindows One-Way ANOVA統(tǒng)計。6.取正常大鼠組、糖尿病大鼠組、糖尿病羅格列酮組的腎臟組織分別制作光鏡標(biāo)本。二.光鏡標(biāo)本制作(1)取材;(

6、2)固定;(3)脫水:升梯度酒精脫水;(4)透明:用二甲苯、觀察組織塊至透明為止;(5)浸蠟:一般用兩個蠟缸;(6)包埋;(7)切片和貼片;(8)HE染色步驟:1)二甲苯5～10分鐘,脫去切片中的石蠟。2)降濃度梯度酒精脫水。100%→95%→90%→80%→70%),每級脫水2～3分鐘以除二甲苯。3)蒸餾水洗,去乙醇10～30分鐘。4)蘇木精,染細(xì)胞核,2～3分鐘。5)0.5%鹽酸酒精分化數(shù)秒。6)流水沖洗,30～40分鐘。7)置入伊

7、紅2～3分鐘,細(xì)胞染成粉紅色。8)洗,去浮色,數(shù)秒。9)梯度酒精脫水,每級3～5分鐘。10)二甲苯10分鐘,使標(biāo)本透明。11)封固。三、光鏡下觀察、拍照.四、數(shù)據(jù)分析所有樣本的數(shù)據(jù)進(jìn)行均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差計算,SPSS11.5數(shù)據(jù)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析(One-Way ANOVA)。P<0.05有顯著性差異,P<0.01為有高度顯著性差異。結(jié)果1.大鼠體重:用鏈酶佐菌素(STZ)誘導(dǎo)建立的糖尿病大鼠體重和對照組相比,體重明顯減輕P<0.01。羅格

8、列酮治療的糖尿病大鼠血糖仍很高,體重?zé)o明顯降低。2.大鼠血糖濃度:用STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠的血糖顯著高于正常對照組P<0.01。糖尿病大鼠用羅格列酮治療組的血糖濃度與未用羅格列酮治療的糖尿病大鼠無顯著差異,P>0.05。3.糖尿病大鼠腎臟組織結(jié)構(gòu),所有標(biāo)本在光學(xué)顯微鏡下放大40倍、400倍觀察:正常對照(C組)腎小球毛細(xì)血管腔均勻一致,無狹窄,腎小管—腎間質(zhì)無炎癥細(xì)胞浸潤;糖尿病(D組)形態(tài)學(xué)改變明顯,大鼠腎小球毛細(xì)血管袢塌陷,管腔閉塞