抗前列腺癌新藥LXT-101緩釋微球注射劑的研究.pdf

1、隨著蛋白質(zhì)組學(xué)和基因組學(xué)計劃的逐步深入，越來越多的多肽、蛋白質(zhì)等生物技術(shù)類藥物在診斷、治療或預(yù)防等各個方面發(fā)揮著十分重要的作用。與小分子藥物相比，多肽及蛋白質(zhì)等大分子藥物穩(wěn)定性差、易被酶降解、生物半衰期短；所以如何將此類藥物有效地遞送到人體相應(yīng)部位一直是藥劑學(xué)研究的重大課題。目前生物技術(shù)類藥物在臨床上應(yīng)用的劑型大多為注射用溶液或凍干粉針劑。此類制劑需頻繁給藥，患者的順應(yīng)性較差，治療費(fèi)用較高。如果將此類藥物制成生物可降解緩釋微球注射劑，能

2、有效防止藥物在體內(nèi)很快消除，顯著延長給藥間隔，持續(xù)維持最低有效濃度，避免了普通制劑很難克服的峰谷現(xiàn)象，因而可以減少總的給藥劑量，減輕某些毒副作用，達(dá)到緩釋長效的目的。此外，緩釋微球注射劑不需植入，釋藥后不必取出，為患者提供了一個很好的給藥方式。因此，緩釋微球注射劑成為近幾十年來藥劑學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。 聚乳酸(PLA)和聚乳酸一羥基乙酸共聚物(PLGA)由于其良好的生物可降解性和組織相容性，作為藥用輔料已獲得FDA的批準(zhǔn)。主藥LX

3、T-10l屬于促黃體生成激素釋放激素(LHRH)拮抗劑類似物，屬新一代前列腺癌治療藥物，與LHRH激動劑相比具有更大的應(yīng)用前景。 本論文以不同分子量和不同乳酸／羥基乙酸(LA／GA)比例的PLGA作為載體，研究制備了LXT-101緩釋微球注射劑，研究內(nèi)容主要包括含量測定和體外釋放度測定的方法學(xué)建立、LXT-10l微球的處方和制備工藝研究、體外釋藥方法的研究、微球的體外釋藥機(jī)理研究、藥效學(xué)以及初步安全性評價、生物相容性以及體內(nèi)過程

4、的研究。 1.LXT-101緩釋微球注射劑的處方前研究本章建立了LXTol01緩釋微球注射劑中藥物含量測定以及釋放度的測定方法。結(jié)果表明HPLC法用于含量測定，方法靈敏、精密、專屬性強(qiáng)；熒光分光光度法用于微球釋放度的測定，方法簡便，靈敏度較高，精密度良好，大大節(jié)約了試劑和時間，縮短了處方工藝的評價周期。 2.LXT-101緩釋微球注射劑的處方設(shè)計和工藝研究分別采用乳化一溶劑萃取法、乳化一溶劑揮發(fā)法以及無水法(包括部分無水

5、法和完全無水法)制備了LXT-101微球。以微球形態(tài)、粒徑及其分布、微球載藥量以及包封率、體外釋藥曲線等作為微球的質(zhì)量評價指標(biāo)，通過單因素考察和正交實(shí)驗對處方和工藝的參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化。這些參數(shù)包括微球固化時間、外水相鹽濃度、有機(jī)溶劑組成、PLGA分子量、LA／GA不同比例以及攪拌速度等。結(jié)果表明所制得的微球表面光滑圓整，偶見少許孔洞，粒徑在20～50ltm之間，包封率在60～80％，體外可持續(xù)釋藥30d。 3.LXT-IOI緩釋微球

6、注射劑體外釋藥方法的建立與評價本章主要對LXT-101微球的體外釋藥條件進(jìn)行了考察，主要包括不同的釋放介質(zhì)、表面活性劑不同濃度、釋放介質(zhì)不同體積、不同釋放容器等。同時建立了加速釋藥方法以縮短評價周期，對長期試驗和短期試驗的釋放度數(shù)據(jù)進(jìn)行點(diǎn)點(diǎn)對應(yīng)的相關(guān)性擬合，結(jié)果表明二者相關(guān)性較好，可用體外短期加速釋放實(shí)驗預(yù)測長期釋藥的釋放度數(shù)據(jù)。 通過對LXT-101微球的外觀形態(tài)、藥物含量、體外釋放行為的考察，表明60Co輻射滅菌對于本課題制

7、備的注射用LXT-101微球有效、可行。凍干保護(hù)劑甘露醇的加入對微球中藥物含量以及釋放曲線的影響較小，并能在一定程度上避免微球的粘連和聚集。 4.LXT-101緩釋微球注射劑釋藥機(jī)理的研究通過測定不同時間點(diǎn)微球在釋放介質(zhì)中的粒徑變化評價微球的溶脹程度，通過失重法間接了解PLGA微球的降解速度，采用Higuchi、零級、一級方程和Ritger-Peppas指數(shù)模型對釋藥曲線進(jìn)行擬合。結(jié)果表明PLGAl4000和PLGA36000微

8、球的釋藥曲線符合Higuchi方程，說明在微球釋藥過程中，擴(kuò)散機(jī)制起到了較為重要的作用。 5.LXT-101緩釋微球注射劑藥效學(xué)研究及初步安全性評價本章以大鼠體內(nèi)睪酮水平作為評價指標(biāo)，對LXT—101緩釋微球注射劑的藥效學(xué)進(jìn)行了評價。結(jié)果表明微球粒徑、制備方法、處方對大鼠體內(nèi)睪酮水平的抑制均有顯著的影響。LXT-101微球的量效關(guān)系實(shí)驗表明其藥效呈劑量依賴型，隨著給藥劑量的增大，起始作用以及可持續(xù)抑制睪酮水平至去勢的時間也隨之升

9、高，起效更快且作用時間延長。大鼠性器官重量下降說明LXT-101緩釋微球注射劑可通過持續(xù)抑制體內(nèi)血清睪酮水平，最大限度的降低睪丸的反應(yīng)，有效地抑制垂體一性腺軸的功能而發(fā)揮藥效。由大鼠睪丸、精囊腺以及前列腺給藥前后形態(tài)學(xué)和病理切片的觀察得出以下結(jié)論：盡管主要性器官有不同程度的炎癥反應(yīng)，但整體形態(tài)沒有明顯變化，也沒有發(fā)生明顯的功能性變化。 6.LXT-101緩釋微球注射劑的生物相容性研究以小鼠和大鼠作為模型動物，對LXT-101微球

10、的生物相容性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明微球注射給藥后僅引起輕微的炎癥反應(yīng)，沒有組織滲透液蓄積，并且沒有觀察到明顯血管與纖維的增生，說明微球制劑的體內(nèi)生物相容性較好。 7.LXT-101緩釋微球注射劑體內(nèi)過程的初步研究與評價以大鼠作為模型動物，對LXT-101長效注射緩釋微球的體內(nèi)過程進(jìn)行了初步研究。通過大鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)的研究表明LXT-101微球在給藥后的1d內(nèi)具有突釋效應(yīng)，藥代動力學(xué)過程符合二室模型。通過測定不同時間點(diǎn)在注射部位微