加味三拗湯治療哮喘作用機(jī)理的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、支氣管哮喘是由多種細(xì)胞(如嗜酸粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、氣道上皮細(xì)胞等)和細(xì)胞組分參與的氣道慢性炎癥性疾病。盡管西醫(yī)學(xué)對(duì)哮喘病發(fā)病機(jī)制和治療方面的研究取得了較大進(jìn)展，但其發(fā)病率在世界范圍內(nèi)仍有增高的趨勢(shì)。因此，對(duì)哮喘病發(fā)病機(jī)理的深入研究和尋找有效的治療方法具有非常重要的意義。中醫(yī)藥治療哮喘具有悠久的歷史和自身特色。傳統(tǒng)的中藥復(fù)方具有多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)的作用特點(diǎn)，能影響哮喘病的諸多病理過(guò)程從而起到治療作用。借助現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)手段

2、明確中藥對(duì)哮喘的治療作用并探討其作用機(jī)理有助于從單味中藥及中藥復(fù)方中發(fā)現(xiàn)療效可靠的哮喘新藥。加味三拗湯(MX)是導(dǎo)師王慶國(guó)教授在古方三拗湯的基礎(chǔ)上加味而成的。該方兼顧哮喘病氣郁、痰凝、瘀阻的病機(jī)特點(diǎn)，在臨床中能有效控制哮喘發(fā)作期癥狀，對(duì)哮喘緩解期治療也起到一定的作用，具有一定的臨床基礎(chǔ)。本課題主要從MX的鎮(zhèn)咳、祛痰、抗炎作用，MX的平喘作用及支氣管解痙作用，MX抗氣道炎癥的作用三個(gè)方面進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，從而明確MX的治療作用并部分闡明其作用

3、機(jī)理。 1目的 觀察MX的鎮(zhèn)咳、祛痰、抗炎作用。明確MX的平喘作用及其對(duì)離體氣管平滑肌的解痙作用。探討MX對(duì)氣道炎癥的影響及MX抗氣道炎癥的作用機(jī)理。 2方法 以咳嗽潛伏期及咳嗽次數(shù)、酚紅排泌量、耳腫脹度為指標(biāo)，觀察MX對(duì)小鼠氨水引咳模型、小鼠氣管酚紅排泌法模型、小鼠二甲苯致耳腫脹模型的影響，從而明確MX的鎮(zhèn)咳、祛痰和抗炎作用。 制備卵蛋白(OVA)致敏豚鼠哮喘模型，觀察MX的平喘作用；制備豚鼠離

4、體氣管螺旋條，分別觀察MX對(duì)磷酸組胺和氯化乙酰膽堿所致豚鼠氣管平滑肌收縮的拮抗作用，MX對(duì)OVA刺激所導(dǎo)致的OVA致敏豚鼠氣管平滑肌收縮的舒張作用和MX對(duì)正常及哮喘豚鼠靜息狀態(tài)下氣管平滑肌的松弛作用。 制備OVA致敏大鼠哮喘模型，觀察MX對(duì)外周血嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)計(jì)數(shù)、肺泡支氣管灌洗液(BALF)中炎癥細(xì)胞總數(shù)、分類(lèi)計(jì)數(shù)和肺功能的影響。采用放免法觀察MX對(duì)大鼠血漿和BALF中ET-1的影響；采用ELISA法觀察MX對(duì)大鼠血清

5、IL-4、IFN-γ和IL-5的影響。 3結(jié)果 3.1MX的鎮(zhèn)咳、祛痰、抗炎作用 3.1.1MX對(duì)濃氨水致小鼠咳嗽反應(yīng)的影響 MX和陽(yáng)性藥咳必清均能延長(zhǎng)濃氨水致小鼠咳嗽的咳嗽潛伏期。與生理鹽水組相比，MX中、大劑量組有極顯著差異(p＜0.01)，MX小劑量組、咳必清陽(yáng)性組有顯著差異(p＜0.05)。同時(shí)，MX和陽(yáng)性藥咳必清均能減少濃氨水所致小鼠2min內(nèi)咳嗽次數(shù)。與生理鹽水組相比，MX大劑量組、咳必清陽(yáng)性

6、組有極顯著差異(p＜0.01)，MX中劑量組有顯著差異(p＜0.05)，MX小劑量組無(wú)顯著差異(p＞0.05)。表明MX具有鎮(zhèn)咳作用。 3.1.2MX對(duì)小鼠氣管酚紅排泌的影響 MX和陽(yáng)性藥氯化銨均能增加小鼠氣管酚紅排泌量。與生理鹽水組相比，MX中劑量組有極顯著差異(p＜0.01)，MX大劑量組、氯化銨陽(yáng)性組有顯著差異(p＜0.05)，MX小劑量無(wú)顯著差異(p＞0.05)。表明MX具有祛痰作用。 3.1.3MX對(duì)二

7、甲苯致小鼠耳腫脹的影響 MX小、中、大劑量組耳腫脹度與生理鹽水組相比無(wú)顯著差異(p＞0.05)。表明MX對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹的炎癥反應(yīng)沒(méi)有明顯的抗炎作用。 3.2MX的平喘作用及對(duì)豚鼠離體氣管平滑肌的影響 3.2.1MX的平喘作用 MX和陽(yáng)性藥地塞米松(Dex)均能延長(zhǎng)OVA致敏豚鼠哮喘的引喘潛伏期。與模型組相比，MX中劑量組有極顯著差異(p＜0.01)，MX小劑量組、Dex陽(yáng)性組有顯著差異(p＜0.05

8、)，MX大劑量組無(wú)顯著差異(p＞0.05)。表明MX具有良好的平喘作用。 3.2.2MX對(duì)豚鼠離體氣管平滑肌的影響 MX對(duì)磷酸組胺和氯化乙酰膽堿引起的豚鼠離體氣管平滑肌收縮有顯著的拮抗作用，對(duì)OVA刺激導(dǎo)致的OVA致敏豚鼠離體氣管平滑肌的收縮有明顯的舒張作用，MX能降低正常及哮喘豚鼠氣管平滑肌的靜息張力，并具有明顯的量效關(guān)系。 3.3MX對(duì)OVA致敏大鼠實(shí)驗(yàn)性哮喘氣道炎癥的影響及其抗氣道炎癥作用機(jī)理的研究

9、 3.3.1MX對(duì)大鼠氣道炎癥的影響 模型組大鼠外周血EOS數(shù)、BALF中白細(xì)胞總數(shù)和EOS分類(lèi)計(jì)數(shù)升高，與正常組相比有極顯著差異(p＜0.01)。MX和陽(yáng)性藥Dex均能減少大鼠外周血EOS數(shù)，與模型組相比，MX中、大劑量組、Dex陽(yáng)性組有極顯著差異(p＜0.01)，MX小劑量組有顯著差異(p＜0.05)。MX和陽(yáng)性藥Dex均能降低大鼠BALF中白細(xì)胞總數(shù)，與模型組相比，MX大劑量組、Dex陽(yáng)性組有極顯著差異(p＜0.01)，M

10、X小、中劑量組有顯著差異(p＜0.05)。MX和陽(yáng)性藥Dex均能降低大鼠BALF中EOS分類(lèi)計(jì)數(shù)，與模型組相比，MX中、大劑量組有極顯著差異(p＜0.01)，MX小劑量組、Dex陽(yáng)性組有顯著差異(p＜0.05)。表明MX能有效減輕大鼠實(shí)驗(yàn)性哮喘的氣道炎癥。 3.3.2MX對(duì)大鼠肺功能的影響 模型組FEV0.2/FVC低于正常組(p＜0.05)。MX和陽(yáng)性藥Dex均能升高大鼠肺功能指標(biāo)FEV0.2/FVC值，與模型組相比，

11、MX小、中、大劑量組、Dex陽(yáng)性組有極顯著差異(p＜0.01)。表明MX能改善大鼠實(shí)驗(yàn)性哮喘的肺通氣功能。 3.3.3MX抗氣道炎癥作用機(jī)理的研究 3.3.3.1MX對(duì)血漿及BALF中ET-1的影響 模型組血漿及BALF中ET-1水平升高，與正常組相比有顯著差異(p＜0.05)。MX和陽(yáng)性藥Dex均能降低大鼠血漿ET-1水平，與模型組相比，MX中、大劑量組、Dex陽(yáng)性組有極顯著差異(p＜0.01)，MX小劑量組無(wú)

12、顯著差異(p＞0.05)；MX和陽(yáng)性藥Dex均能降低大鼠BALF中ET-1水平，與模型組相比，MX中、大劑量組有顯著差異(p＜0.05)，MX小劑量組、Dex陽(yáng)性組無(wú)顯著差異(p＞0.05)。表明MX能降低大鼠血漿及BALF中ET-1的水平。 3.3.3.2MX對(duì)血清IL-4、IFN-γ和IL-5的影響 IL-4：模型組IL-4水平明顯升高，與正常組相比有顯著差異(p＜0.05)。MX和陽(yáng)性藥Dex均能降低血清IL-4水

13、平，與模型組相比，Dex陽(yáng)性組有極顯著差異(p＜0.01)，MX小劑量組有顯著差異(p＜0.05)，MX中、大劑量組無(wú)顯著差異(p＞0.05)。 IFN-γ：模型組IFN-γ水平明顯降低，與正常組相比有極顯著差異(p＜0.01)。MX和陽(yáng)性藥Dex均能升高血清IFN-γ水平，與模型組相比，MX中劑量組有極顯著差異(p＜0.01)，MX小、大劑量組、Dex陽(yáng)性組無(wú)顯著差異(p＞0.05)。 IFN-γ/IL-4比值：模型組

14、IFN-γ/IL-4比值明顯降低，與正常組相比有極顯著差異(p＜0.01)。MX和陽(yáng)性藥Dex均能升高IFN-γ/IL-4比值，與模型組相比，MX小劑量組、Dex陽(yáng)性組有顯著差異(p＜0.05)，MX中劑量組和MX大劑量組無(wú)顯著差異(p＞0.05)。 IL-5：模型組IL-5水平明顯升高，與正常組相比有顯著差異(p＜0.05)。MX和陽(yáng)性藥Dex均能降低血清IL-5水平，與模型組相比，MX小劑量組、Dex陽(yáng)性組有顯著差異(p＜0

15、.05)，MX中、大劑量組無(wú)顯著差異(p＞0.05)。 表明MX能降低Th2細(xì)胞因子IL-4、IL-5水平，升高Th1細(xì)胞因子IFN-γ水平，升高IFN-γ/IL-4比值，從而調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡。 4結(jié)論 4.1MX具有良好的鎮(zhèn)咳、祛痰作用，對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹沒(méi)有明顯的抗炎作用。 4.2MX具有良好的平喘作用。離體實(shí)驗(yàn)表明，MX對(duì)磷酸組胺和氯化乙酰膽堿引起的豚鼠氣管平滑肌收縮有顯著的拮抗作用，對(duì)OV

16、A刺激導(dǎo)致的OVA致敏豚鼠氣管平滑肌的收縮有明顯的舒張作用，MX能降低正常及哮喘豚鼠氣管平滑肌的靜息張力，并且對(duì)哮喘豚鼠氣管平滑肌的松弛作用好于對(duì)正常豚鼠氣管平滑肌的松弛作用。 4.3MX能有效改善氣道炎癥和肺功能，并能降低血漿和BALF中ET-1水平，降低血清中Th2細(xì)胞因子IL-4、IL-5的水平，增加Th1細(xì)胞因子IFN-γ的水平。表明MX能通過(guò)降低ET-1水平、調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡，從而起到控制氣道炎癥、改善肺通氣功能