MEHP誘導(dǎo)大鼠C6神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞向少突膠質(zhì)細(xì)胞分化.pdf

1、目的:DEHP是運(yùn)用最廣泛的增塑劑,MEHP是其在體內(nèi)的活性代謝產(chǎn)物。近年來,大量流行病學(xué)調(diào)查資料顯示嬰幼兒與兒童的DEHP、MEHP的暴露水平高于成人。有實(shí)驗(yàn)研究表明MEHP可以影響神經(jīng)元的增殖分化,流行病學(xué)調(diào)查也顯示高水平暴露于DEHP的母親產(chǎn)下的嬰兒神經(jīng)反射情況欠佳。為了探討MEHP是否對神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用,本實(shí)驗(yàn)采用C6神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞模型研究MEHP對神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞分化的影響。
　　方法:培養(yǎng)未分化的大鼠C6細(xì)胞;將未

2、分化的C6細(xì)胞置于不同濃度的MEHP(100mg/L、50mg/L、10mg/L、1mg/L)低血清培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng),培養(yǎng)時(shí)間為24小時(shí)、48小時(shí),同時(shí)設(shè)立對照組(0.1％DMSO);采用MTT及流式細(xì)胞術(shù)檢測不同濃度的MEHP對C6細(xì)胞活性的影響及是否發(fā)生凋亡;采用倒置顯微鏡觀察各組細(xì)胞形態(tài)變化,統(tǒng)計(jì)陽性延展細(xì)胞百分?jǐn)?shù);采用免疫熒光和免疫印跡檢測各組MBP、GFAP、PPARγ蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:1.MTT及流式細(xì)胞術(shù)檢測

3、顯示,MEHP影響C6細(xì)胞活性,抑制細(xì)胞生長,但在該劑量及作用時(shí)間范圍內(nèi)不引起凋亡。2.倒置顯微鏡觀察各組細(xì)胞形態(tài),對照組大部分未分化C6細(xì)胞胞體呈長梭形、有的呈多角形,胞體有短而粗的突起,而暴露于MEHP的實(shí)驗(yàn)組與對照組相比,細(xì)胞胞體較光滑、變得更圓,兩端突起變得更細(xì)更長;隨著MEHP濃度和作用時(shí)間的增加,陽性延展細(xì)胞數(shù)增多。3.免疫熒光和免疫印跡結(jié)果顯示,PPARγ、GFAP的表達(dá)無明顯差異,而隨著MEHP濃度的增加和作用時(shí)間的增加