C-jun-AP-1抑制劑在雌激素調(diào)節(jié)BSEP及NTCP表達中的作用.pdf

1、目的:研究不同濃度17β雌二醇(E2)對L-02人正常肝細胞膽鹽輸出泵(BSEP)及鈉離子?；撬峁厕D(zhuǎn)運子(NTCP)表達的影響以及激活蛋白-1(c-jun/AP-1)抑制劑SP600125在雌激素調(diào)節(jié)肝細胞BSEP及NTCP表達中的作用。
　　 方法:體外培養(yǎng)的人正常肝細胞株L-02,用濃度為500nM的17β-雌二醇干預不同時間(6、12、18、24、30、36小時)；用不同濃度的17β-雌二醇(0.1,1.0,10,100,

2、500,1000nmol/L)干預L-02肝細胞(其中0.1、1.0、10nmol/L為生理濃度)24h；以及不同濃度的SP600125(5、10、20umon/l)與17β-雌二醇(500nmol/l)共同干預于L-02肝細胞,提取細胞總RNA并收集細胞培養(yǎng)上清液,采用RT-PCR法檢測各組肝細胞BSEP與NTCP mRNA的表達情況,用生化方法檢測各組培養(yǎng)液中膽汁酸濃度。
　　 結(jié)果:(1)隨著E2作用時間延長,肝細胞BSE

3、P mRNA及NTCP mRNA表達水平明顯下降,各組問比較有顯著差異性(P<0.05),且呈時間依賴性(R=-0.982,R=-0.959,P<0.05)；而培養(yǎng)液中膽汁酸濃度在6h、12h、18h、24h兩兩比較無差異性(P>0.05),30小時與24小時相比有差異性(P<0.05),36小時與30小時相比亦無明顯差別(P>0.05)；(2)生理濃度的17β-雌二醇(0.1、1.0、10nmol/L)不影響肝細胞BSEP mRNA及

4、NTCP mRNA的表達及膽汁酸的分泌,與空白對照組相比無顯著差異性(P>0.05)；而高濃度的E2下調(diào)BSEP及NTCP表達(P<0.05),并使肝細胞分泌膽汁酸減少(P<0.05),呈劑量依賴關系(R=-0.884,R=-0.868,P<0.05),且在500nmol/l時抑制作用最明顯。(3)c-jun/AP-1抑制劑SP600125可抑制AP-1的活性,明顯抑制雌激素下調(diào)BSEP及NTCP表達,而使BSEP及NTCP mRNA表

5、達升高,培養(yǎng)液中膽汁酸水平升高,與對照組相比有顯著性差異(P<0.05,P<0.05,P<0.05),且呈劑量依賴關系(R=0.643,R=0.539,R=0.693,P<0.05)。
　　 結(jié)論:生理濃度雌激素不影響肝細胞BSEP及NTCP的表達,而高于生理濃度的雌激素可在轉(zhuǎn)錄水平下調(diào)肝細胞BSEP及NTCP的表達,其抑制效應有量效相關性；AP-1抑制劑SP600125明顯抑制雌激素下調(diào)BSEP及NTCP表達,使BSEP及NT