萊菔硫烷改善肝細(xì)胞脂肪變及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)調(diào)控機(jī)制.pdf

1、非酒精性脂肪肝是高發(fā)且嚴(yán)重危害人類健康的飲食相關(guān)性肝損傷，從膳食角度尋找其防治因子具有重要意義。前期研究表明萊菔硫烷（SFN）可減輕酒精性肝損傷及調(diào)控脂代謝，但對(duì)非酒精性肝損傷的作用及機(jī)制尚無(wú)深入探討。本研究探討SFN預(yù)保護(hù)人肝細(xì)胞HHL-5后，能否抵抗油酸/軟脂酸對(duì)肝細(xì)胞脂代謝的病理性損傷，重點(diǎn)探究?jī)?nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激調(diào)控通路的作用，主要研究結(jié)果如下。
　　油酸/軟脂酸（1:2）作誘導(dǎo)劑，100-500μmol/L作用于HHL-5細(xì)胞，油

2、紅O染色檢測(cè)脂滴，再檢測(cè)肝細(xì)胞代謝酶和甘油三酯（TC）及膽固醇（TG），發(fā)現(xiàn)油酸/軟脂酸300μmol/L時(shí)，多數(shù)細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)紅色圓珠狀且非常飽滿的脂滴，誘導(dǎo)劑劑量增大，脂滴增多。油酸/軟脂酸（1:2）300μmol/L作用24h，TC和TG含量明顯升高（P<0.01），谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）與谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）活性顯著升高；誘導(dǎo)劑濃度大于400μmol/L，細(xì)胞死亡。因此，將油酸/軟脂酸（1:2）300μmol/L作用24h作為誘導(dǎo)肝細(xì)

3、胞HHL-5脂代謝異常的作用方式。SFN分別以時(shí)間效應(yīng)和劑量效應(yīng)方式預(yù)保護(hù)細(xì)胞，再用油酸/軟脂酸刺激24h，發(fā)現(xiàn)TG和TC含量與陽(yáng)性對(duì)照組比較顯著降低（P<0.01），10μmol/L SFN對(duì)TG與TC含量降低最為明顯，抑制AST和ALT增加，抑制后水平與陰性對(duì)照組接近。
　　以內(nèi)質(zhì)網(wǎng)為切入點(diǎn)，透射電鏡檢測(cè)結(jié)果表明，油酸/軟脂酸作用細(xì)胞24h可引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，提示內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能受損，同時(shí)影響線粒體功能，表現(xiàn)為線粒體顏色加深。S FN

4、預(yù)保護(hù)后能明顯改善內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的擴(kuò)張，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)基本恢復(fù)到陰性對(duì)照組水平，表現(xiàn)為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)成條索狀，并對(duì)線粒體損傷明顯改善。Real-time PCR檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)調(diào)控蛋白XBP1、GRP78轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)情況。發(fā)現(xiàn)油酸/軟脂酸（1:2）300μmol/L誘導(dǎo)肝細(xì)胞24h后，XBP1與GRP78mRNA表達(dá)量顯著增加。10μmol/L SFN使二者表達(dá)量比誘導(dǎo)組降低。SFN作用時(shí)間延長(zhǎng)，XBP1與GRP78mRNA表達(dá)量減小，24h最顯著。流式細(xì)胞術(shù)