新型鉑類化合物Pt(0506)101的抗肺癌作用及機制研究.pdf

1、研究背景和研究目的:
　　肺癌(lung cancer)是最常見的肺原發(fā)性惡性腫瘤，近年來肺癌的發(fā)病率和病死率迅速上升。由于肺癌對當(dāng)前常用鉑類藥物易產(chǎn)生耐藥性，因此有必要研發(fā)新的鉑類替代藥物。Pt(0506)101是一種新合成的鉑類化合物，本實驗通過離體和整體實驗研究了Pt(0506)101的抗肺癌作用及機制。
　　方法:
　　1.整體試驗:建立裸鼠肺癌移植瘤模型，包括A549，H292等多種肺癌。Pt(0506)10

2、1尾靜脈注射給藥，每4天給藥1次，共5次。順鉑和卡鉑作為陽性對照藥。每3天測量小鼠體重及腫瘤體積1次。給藥結(jié)束后取腫瘤稱重，并拍照。
　　2.離體試驗:采用MTT法檢測Pt(0506)101對各種腫瘤細(xì)胞的體外細(xì)胞毒作用，流式細(xì)胞儀檢測Pt(0506)101作用后的肺癌細(xì)胞A549、H292的細(xì)胞周期、凋亡率的變化。
　　3.作用機制研究:1）在肺癌細(xì)胞A549、H292中加入不同濃度的Pt(0506)101，并以順鉑和卡鉑

3、作為陽性對照藥，48 h后檢測凋亡蛋白以及信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)情況。2）A549細(xì)胞中p53基因特異性敲除后，western blot法檢測凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)。3）JNK抑制劑(SP600125)、p38抑制劑(SB203580)、Erk1/2抑制劑(U0126)以及PI3K抑制劑(LY294002)干預(yù)A549細(xì)胞后，western blot法檢測Pt(0506)101誘導(dǎo)表達(dá)上升凋亡相關(guān)蛋白。4）超聲凍融法提取并測定Pt(0506)

4、101作用后A549細(xì)胞內(nèi)GSH水平，并用流式細(xì)胞儀進(jìn)一步檢測ROS的表達(dá)情況。用抗氧化劑NAC干預(yù)后，測定細(xì)胞凋亡率。
　　結(jié)果:
　　1.整體試驗結(jié)果:Pt(0506)101-30mg/kg、60mg/kg、120mg/kg呈劑量依賴性地抑制裸鼠A549、H292肺癌移植瘤的生長，且與模型組比較有顯著性差異，A549的腫瘤抑制率分別為31.00％、47.03％、64.64％; H292的腫瘤抑制率分別為45.53％、53

5、.79％、65.41％。Pt(0506)101抗肺癌作用略弱于順鉑DDP-6mg/kg，與卡鉑CBP-60mg/kg接近。
　　2.離體試驗結(jié)果:1）Pt(0506)101對A549、H292、H460等肺癌細(xì)胞株的細(xì)胞毒作用較強，雖然作用不及順鉑，卻明顯強于對卡鉑。對順鉑耐藥株A549/PPD的作用強度較順鉑強;而對正常肺上皮細(xì)胞株BEAS-2B，其作用強度比順鉑弱2倍，此外，Pt(0506)101對胃癌MGC-803，HGC-

6、27具有很強的抗癌活性，提示Pt(0506)101在抗瘤作用方面有選擇性。2）100μM Pt(0506)101預(yù)處理肺癌細(xì)胞48 h能顯著性促進(jìn)A549，H292和LTEP-A-2三種肺癌細(xì)胞發(fā)生凋亡**(P＜0.01)，其效果和10μM順鉑和200μM卡鉑作用相當(dāng)。3）Pt(0506)101并不能引起肺癌細(xì)胞周期的改變，而陽性對照藥（順鉑和卡鉑）明顯增加A549、H292細(xì)胞株細(xì)胞周期S期的細(xì)胞比例，減少G1期的細(xì)胞比例。提示Pt(

7、0506)101引起細(xì)胞凋亡與細(xì)胞周期的阻滯無關(guān)。
　　3.作用機制研究:1）Pt(0506)101呈濃度依賴上調(diào)p53、Fas、Bax等蛋白的表達(dá)，下調(diào)Bcl-2表達(dá)，顯著性地提高Bax/B1-2的比例。2）用siRNA方法特異性敲除A549細(xì)胞p53基因后能有效抑制Pt(0506)101誘導(dǎo)表達(dá)上升的Fas和Bax，結(jié)果證明p53可能位于Fas，Bax的上游發(fā)揮作用。3）Pt(0506)101能激活p-JNK蛋白表達(dá)，而且只有

8、JNK抑制劑SP600125能顯著抑制Pt(0506)101誘導(dǎo)的凋亡蛋白的表達(dá)。提示Pt(0506)101可能通過SPAK/JNK信號通路誘發(fā)肺癌細(xì)胞凋亡。4）Pt(0506)101能顯著降低A549細(xì)胞內(nèi)GSH水平，升高ROS水平;抗氧化劑NAC干預(yù)后，能下調(diào)Pt(0506)101誘導(dǎo)表達(dá)上升的凋亡率。提示Pt(0506)101誘導(dǎo)升高細(xì)胞內(nèi)的活性氧可能是抑制或殺死癌細(xì)胞一個十分重要的啟動因子。
　　結(jié)論:
　　綜上結(jié)果