前列地爾脂微球載體制劑對(duì)腦死亡大鼠肝臟保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 本課題使用大鼠腦死亡模型，探討腦死亡大鼠肝臟的損傷機(jī)制，以及前列地爾脂微球載體制劑對(duì)大鼠腦死亡后肝臟損傷的保護(hù)作用。為臨床利用腦死亡供體進(jìn)行肝臟移植提供理論依據(jù)。 方法： 健康清潔SD大鼠24只，雌雄不拘，體重220-280g，隨機(jī)分為4組，每組6只，即腦死亡組(B)，應(yīng)用顱內(nèi)加壓法建立腦死亡模型，通過(guò)呼吸、循環(huán)支持維持實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦死亡狀態(tài)6小時(shí)；假手術(shù)組(C)，除不進(jìn)行硬腦膜外導(dǎo)管加壓外，其余處理同腦死亡

2、組；干預(yù)組(L1、L2)建立腦死亡模型，L1組泵入前列地爾脂微球載體制劑20ng·Kg-1·min-1，L2組泵入前列地爾脂微球載體制劑40ng·Kg-1·min-1。B組、L1和L2組于硬膜外加壓前、加壓過(guò)程中、腦死亡狀態(tài)時(shí)記錄平均動(dòng)脈壓；于硬膜外加壓前(T1)，確認(rèn)腦死亡時(shí)(T2)，腦死亡6h(T3)，于股靜脈抽取血標(biāo)本2ml，血清自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase，ALT)、天冬氨

3、酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartatea minotrans-ferase,AST)，放射免疫法測(cè)定血清內(nèi)皮素-1(endothelin-1，ET-1)水平，ELISA法測(cè)定腫瘤壞死因子-α(tumornecrosis factor-α，TNF-α)水平。于腦死亡6小時(shí)取材，切取肝臟組織標(biāo)本包埋固定，切片，HE染色觀察肝細(xì)胞損傷情況。應(yīng)用SPSS13.0軟件包處理數(shù)據(jù)，統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多個(gè)樣本間比較用單因素方差分析，顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)

4、取a=0.05。 結(jié)果： 1.平均動(dòng)脈壓(MAP)變化：顱內(nèi)加壓前，各組間MAP無(wú)顯著性差異P>0.05；加壓過(guò)程中，B組、L1和L2組較C組明顯增高，有顯著性差異P<0.05；但B組與L1、L2組問(wèn)無(wú)顯著性差異P>0.05。腦死亡狀態(tài)下B組、L1和L2組MAP較正常狀態(tài)顯著降低，但組間無(wú)顯著性差異P<0.05。 2.ALT、AST、TNF-α、ET-1表達(dá)水平：在T1，T2，T3時(shí)間點(diǎn)，各試驗(yàn)組ALT、AST差

5、異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05；在T3時(shí)間點(diǎn)，B組、L1和L2組與C組比較有明顯差異P<0.05，L1和L2組低于B組，差異有顯著性P<0.05，L2組與L1組無(wú)明顯差異P>0.05。 3.肝臟形態(tài)學(xué)變化： C組各時(shí)間點(diǎn)光鏡下肝細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，染色均勻，未見(jiàn)肝細(xì)胞壞死、水腫；B組肝細(xì)胞染色較淺，胞漿松散，細(xì)胞體積增大，部分肝細(xì)胞出現(xiàn)較明顯的水腫，空泡樣改變；L1、L2組變化較小，基本形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞輕度水腫，空泡樣

6、改變較B組減輕。 結(jié)論： 1.應(yīng)用改進(jìn)的緩慢間斷顱內(nèi)加壓法制作大鼠腦死亡模型，可以有效的模擬臨床腦死亡狀態(tài)。 2.腦死亡狀態(tài)可以引起腦死亡大鼠肝臟損傷性改變。大鼠腦死亡狀態(tài)下血流動(dòng)力血改變和炎癥因子的釋放可能是造成腦死亡大鼠供肝損傷的主要原因。 3.腦死亡后血清中TNF-α、ET-1水平增高可能是導(dǎo)致肝臟損傷的主要原因之一。 4.前列地爾脂微球載體制劑能明顯減輕腦死亡狀態(tài)下大鼠肝臟的損傷。可能與其