NF-κB抑制劑PDTC預(yù)防腦死亡豬腎臟損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、腦死亡(Brain Death，BD)供體已在臨床器官移植中應(yīng)用。文獻(xiàn)表明，腦死亡供體移植后的并發(fā)癥、排斥反應(yīng)的程度、再移植率及死亡率都明顯高于活體供體，這說明腦死亡供腎在移植以前即已發(fā)生了損傷性改變。研究表明腦死亡能單獨(dú)誘導(dǎo)多種促炎癥因子的釋放，并通過神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)激活細(xì)胞因子的級聯(lián)反應(yīng)，引起臟器形態(tài)、功能的改變。核因子κB(Nuclear factorκB，NF-κB)調(diào)控著細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)、生長因子及細(xì)胞黏附分子等多種基因的表達(dá)

2、，與炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡和免疫應(yīng)答密切相關(guān)。NF-κB過度激活是否為腦死亡致腎臟損傷的機(jī)制之一，尚待研究。吡咯二硫氨基甲酸酯(Pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC)被認(rèn)為是NF-κB的特異性抑制劑。研究表明PDTC在FK506、內(nèi)毒素、腎切除、血管緊縮素Ⅱ?qū)е碌哪I臟損傷模型中具有改善腎臟功能，減輕腎臟病理損害的作用，其作用機(jī)制是抑制NF-κB的活性。但是PDTC能否影響腦死亡狀態(tài)下腎臟NF-κB的活性，并對腎臟

3、損傷產(chǎn)生保護(hù)作用，國內(nèi)外尚未見報(bào)道。因此，進(jìn)一步研究NF-κB在腦死亡后腎臟損傷中的作用及PDTC對腎臟損傷的防護(hù)作用，將會為腦死亡供腎的保護(hù)提供理論依據(jù)。 目的 探討NF-κB在豬腦死亡腎臟損傷中的作用及PDTC對豬腦死亡后腎臟的防護(hù)作用。 材料方法 25±4kg的健康長白豬18只，隨機(jī)分為三組，每組各6只。對照組，僅開顱麻醉維持行開、關(guān)腹手術(shù)：腦死亡組，按照緩慢顱內(nèi)加壓法建立腦死亡模型；PDTC組于判

4、定腦死亡后滴注PDTC(15mg/kg，加入100mL生理鹽水中)；腦死亡組及對照組于同期靜滴等量生理鹽水；腦死亡判定的標(biāo)準(zhǔn)：①深昏迷；②瞳孔對光反射和角膜反射消失；⑨自主呼吸停止：④腦電圖呈電靜息；⑤阿托品試驗(yàn)陰性；⑥復(fù)核間隔時(shí)間12小時(shí)：復(fù)核結(jié)果與前述結(jié)果相同時(shí)方可判定為腦死亡；腦死亡后維持血流動力學(xué)和生命體征穩(wěn)定。在腦死亡后6h、12h、24h開腹經(jīng)下腔靜脈取血5mL，制備血清：并切取同側(cè)腎臟組織，部分置于4﹪多聚甲醛溶液固定，部

5、分置液氮保存。ELISA法檢測血清腫瘤壞死因子-α(ttlmor necrosisfactor-α，TNF-α)水平，免疫組化法檢測腎臟組織中單核細(xì)胞趨化蛋白-1(Molynocyte chemoattractant protein-1，MCP-1)蛋白表達(dá)，實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real time fluorescence quantitative PCR，RT-FIQ-PCR)法測定組織中NF-κBmRNA、MCP-1 mRNA表達(dá)，

6、光鏡下觀察腦死亡腎臟形態(tài)變化并檢測血清BUN、Cr水平。結(jié)果1．腎臟形態(tài)學(xué)改變：對照組各時(shí)間點(diǎn)腎臟形態(tài)基本正常；腦死亡組可見腎小管上皮細(xì)胞水腫、管腔狹窄、炎細(xì)胞浸潤。同腦死亡組各對應(yīng)時(shí)間點(diǎn)相比，PDTC組細(xì)胞水腫、管腔狹窄、炎細(xì)胞浸潤減輕。 2．血清BUN和Cr水平：對照組各時(shí)間點(diǎn)血清BUN、Cr水平無差異(P>0.05)；腦死亡組和PDTC組BUN、Cr自腦死亡6h開始升高，并持續(xù)到腦死亡后24小時(shí)，組內(nèi)相鄰時(shí)間點(diǎn)之間差異顯著

7、(P<0.05)；同腦死亡組相比，PDTC組各對應(yīng)時(shí)間點(diǎn)血清BUN、Cr顯著降低(P<0.05)。 3．血清TNF-α水平：對照組各時(shí)間點(diǎn)血清TNF-α水平無差異(P>0.05)；腦死亡組和PDTC組TNF-α水平均自腦死亡后6h開始升高，可持續(xù)至24h，組內(nèi)相鄰時(shí)間點(diǎn)之間差異顯著(P<0.05)；同腦死亡組相比，PDTC組各對應(yīng)時(shí)間點(diǎn)血清TNF-α顯著降低(P<0.05)。 4．腎臟NF-κB tuRNA的表達(dá)：對照組

8、各時(shí)間點(diǎn)NF-κB mRNA表達(dá)無差異(P>0.05)；腦死亡組和PDTC組NF-κB mRNA表達(dá)均自腦死亡后6h開始升高，可持續(xù)至24h，組內(nèi)相鄰時(shí)間點(diǎn)之間差異顯著(P<0.05)；同腦死亡組相比，PDTC組各對應(yīng)時(shí)間點(diǎn)NF-κB tuRNA顯著降低(P<0.05)。 5．腎臟MCP-1蛋白和mRNA表達(dá)：對照組各時(shí)間點(diǎn)MCP-1蛋白和mRNA的表達(dá)均無差異(P>0.05)；腦死亡組和PDTC組MCP-1蛋白和mRNA表達(dá)水