MicroRNA150在氧化型低密度脂蛋白誘導(dǎo)的THP-1源性巨噬細(xì)胞凋亡中的作用及機(jī)制.pdf

1、動脈粥樣硬化斑塊內(nèi)巨噬細(xì)胞凋亡是易損斑塊形成的重要原因，體內(nèi)脂質(zhì)過氧化形成的氧化型低密度脂蛋白是引起巨噬細(xì)胞凋亡的明確因素。斑塊內(nèi)增加的巨噬細(xì)胞P53表達(dá)與巨噬細(xì)胞凋亡及斑塊穩(wěn)定性密切相關(guān)。MicroRNA通過在轉(zhuǎn)錄后水平負(fù)調(diào)節(jié)基因的表達(dá)調(diào)控細(xì)胞的凋亡。MicroRNA150在惡性淋巴瘤中能降低P53的表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)主要從以下三個(gè)部分探討MicroRNA150在氧化型低密度脂蛋白誘導(dǎo)的THP-1源性巨噬細(xì)胞的凋亡中的作用及其機(jī)制。

2、　　 第一部分 MicroRNA150在氧化型低密度脂蛋白誘導(dǎo)的THP-1源性巨噬細(xì)胞中的表達(dá)及其相關(guān)性研究
　　 目的：觀察MicroRNA150在氧化型低密度脂蛋白誘導(dǎo)的THP-1源性巨噬細(xì)胞的表達(dá)，并初步探討其相關(guān)性。
　　 方法：以不同濃度的氧化型低密度脂蛋白（0，25，50，75，100mg/l）刺激THP-1源性的巨噬細(xì)胞，24小時(shí)，48小時(shí)CCK8檢測細(xì)胞活性，48小時(shí)流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡情況，實(shí)時(shí)熒光

3、定量RT-PCR檢測各組細(xì)胞中MicroRNA150的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：⑴氧化型低密度脂蛋白作用后，THP-1源性巨噬細(xì)胞的細(xì)胞活性下降，凋亡率升高，呈劑量依賴型（p<0.01）MicroRNA150 表達(dá)下調(diào)（P<0.01），也呈劑量依賴型。
　　 結(jié)論：氧化型低密度能誘導(dǎo)THP-1源性巨噬細(xì)胞凋亡，其機(jī)制可能與下調(diào)MicroRNA150的表達(dá)相關(guān)。
　　 第二部分 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染MicroRNA150mimi

4、cs觀察MicroRNA150對氧化型低密度脂蛋白誘導(dǎo)的THP-1源性巨噬細(xì)胞凋亡的影響
　　 目的：通過轉(zhuǎn)染MicroRNA150mimics，使細(xì)胞過表達(dá)MicroRNA150，進(jìn)一步探討MicroRNA150在氧化型低密度脂蛋白誘導(dǎo)的THP-1源性巨噬細(xì)胞凋亡中的作用。
　　 方法；應(yīng)用Lipofectine2000將MicroRNA150mimics轉(zhuǎn)染入THP-1源性巨噬細(xì)胞，24小時(shí)后以不同濃度（0，25，5

5、0，75，100mg）氧化型低密度脂蛋白刺激轉(zhuǎn)染組，陰性對照組及空白組48小時(shí)，CCK8法檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的活性，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡情況，實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測各組細(xì)胞中MicroRNA150的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 ⑴轉(zhuǎn)染組MicroRNA150表達(dá)較空白組，陰性對照組細(xì)胞明顯增加（P<0.01）
　　 ⑵轉(zhuǎn)染組的細(xì)胞活性抑制率，凋亡率較空白組，陰性對照組細(xì)胞明顯下降，凋亡降低。（P 均<0.0

6、1）。
　　 結(jié)論：MicroRNA150在氧化型低密度脂蛋白誘導(dǎo)的THP-1源性巨噬細(xì)胞凋亡中有抗凋亡作用。
　　 第三部分 MicroRNA150抗氧化型低密度脂蛋白誘導(dǎo)的THP-1源性巨噬細(xì)胞凋亡的可能的作用機(jī)制
　　 目的：探討MicroRNA150的是否通過負(fù)調(diào)節(jié)P53mRNA起作用。
　　 方法：挑選第二章中轉(zhuǎn)染組，陰性對照組，空白對照組中兩組濃度的細(xì)胞（0，50mg），熒光實(shí)時(shí)RT-PCR檢