尾加壓素Ⅱ通過(guò)Smad2-3激活誘導(dǎo)心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化.pdf

1、背景與目的：尾加壓素II（Urotensin II, UII）是繼內(nèi)皮素之后發(fā)現(xiàn)的強(qiáng)力縮血管活性肽，我們研究小組前期發(fā)現(xiàn)，UII能促進(jìn)動(dòng)脈外膜成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化和血管纖維化，促進(jìn)心肌成纖維細(xì)胞增殖和心肌纖維化發(fā)展。近年報(bào)道微血管內(nèi)皮細(xì)胞在某些因素刺激下，能夠向間質(zhì)成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化，即內(nèi)皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（endothelial-mesenchymal transition，EndMT），從而參與心肌纖維化過(guò)程。其特征是細(xì)胞獲得間質(zhì)細(xì)

2、胞標(biāo)志物，如α-SMA，同時(shí)失去內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物，如血管內(nèi)皮鈣粘蛋白(Vascular endothelial cadherin, VE-cadherin）和CD31。我們最近發(fā)現(xiàn)， UII能誘導(dǎo)EndMT發(fā)生，但其機(jī)制尚未完全闡明。為此，本工作在前期基礎(chǔ)上，擬進(jìn)一步探討UII促進(jìn)心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞向間質(zhì)轉(zhuǎn)化的細(xì)胞內(nèi)分子機(jī)制。
　　方法：體外培養(yǎng)新生 SD大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞，無(wú)血清培養(yǎng)至靜止期，分別加入不同濃度UII（10-10

3、-10-7mol/l）刺激不同時(shí)間（6h-48h），觀察UII對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的影響及對(duì)Smad2/3磷酸化水平的影響。為了探討UII對(duì)Smad2/3磷酸化水平的影響是否通過(guò)UII受體，提前30分加入U(xiǎn)T阻斷劑SB710411，然后加入U(xiǎn)II共同孵育至24小時(shí)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，采用蛋白免疫印跡試驗(yàn)（Western blotting）測(cè)定細(xì)胞中α-SMA，VE-cadherin及p-Smad2/3的水平；采用RNA干擾技術(shù)，分別使Smad2

4、和Smad3基因表達(dá)下調(diào)，采用Western blotting檢測(cè)UII對(duì)細(xì)胞中α-SMA及VE-cadherin表達(dá)的影響，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞上CD31的表達(dá)。
　　結(jié)果：1、UII（10-8mol/l）以時(shí)間依賴的方式促進(jìn)心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞中α-SMA的表達(dá)，刺激24h達(dá)到高峰，較對(duì)照增加120.2％；同時(shí)，UII以濃度依賴的方式抑制VE-cadherin表達(dá)，同樣刺激24h后，隨UII濃度（10-10-10-7mol/l）

5、逐漸增加，作用漸增強(qiáng)，在濃度為10-7mol/l時(shí)達(dá)高峰。
　　2、UII以時(shí)間依賴的方式上調(diào)Smad2/3磷酸化水平， UII（10-8mol/l）刺激24h時(shí)作用最強(qiáng)，較對(duì)照組增加811.6%；該作用可被 UII受體阻斷劑 SB-710411（10-6mol/l）所阻斷。
　　3、通過(guò)RNA干擾使Smad2和Smad3基因表達(dá)下調(diào)，可減弱心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞上UII所致的α-SMA表達(dá)上調(diào)及VE-cadherin和CD31