高糖和胰島素對(duì)腎小球系膜細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4表達(dá)的影響及易位的時(shí)間效應(yīng).pdf

1、目的：糖尿病(DM)是嚴(yán)重危害人類健康的疾病，糖尿病腎病(DN)則是糖尿病危害性最大的慢性并發(fā)癥之一。已有研究證實(shí)，胰島素抵抗是2型糖尿病發(fā)病機(jī)制中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，而葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制障礙是胰島素抵抗的一個(gè)重要方面。胰島素通過(guò)與細(xì)胞膜上的胰島素受體結(jié)合后，經(jīng)由PI3K和CAP/Cbl兩條信號(hào)傳導(dǎo)途徑使葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(GLUT4)易位至胞膜，以促進(jìn)組織攝取葡萄糖從而維持血糖穩(wěn)態(tài)。本實(shí)驗(yàn)擬探討高糖和胰島素對(duì)體外培養(yǎng)的腎小球系膜細(xì)胞(GMC)G

2、LUT4表達(dá)的影響以及胰島素引起GLUT4易位的時(shí)間過(guò)程，研究糖尿病腎病發(fā)生發(fā)展機(jī)制中GLUT4的作用，為糖尿病腎病防治尋求新的途徑。 方法： 將體外培養(yǎng)的鼠1097系膜細(xì)胞分為8組：①正常對(duì)照組，②生理濃度胰島素組(10<'-9>mol/L Ins)，③低濃度胰島素組(10<'8>mol/L Ins)，④高濃度胰島素組(10<'-6>mol/L Ins)，⑤高糖組(30 mmol/L Glu)，⑥甘露醇組，⑦高糖加高濃

3、度胰島素組(30 mmol/L Glu+10<'-6> mol/L Ins)，⑧高糖加生理濃度胰島素組(30 mmol/L Glu+10<'-9>mol/L Ins)。②③④組均作用5，15，30，45，60分鐘共5個(gè)時(shí)間點(diǎn)，其余各組作用15分鐘后，GLUT4免疫熒光染色，激光共聚焦顯微鏡觀察各組系膜細(xì)胞GLUT4分布，測(cè)定其熒光強(qiáng)度同時(shí)用RT-PCR檢測(cè)GLUT4 mRNA表達(dá)。 結(jié)果： 1．正常腎小球系膜細(xì)胞可觀察到

4、GLUT4表達(dá)。 2．胰島素增加GLUT4的表達(dá)，高糖組GLUT4表達(dá)明顯下降。 3．胰島素可引起系膜細(xì)胞GLUT4易位。 4．低濃度胰島素組、高濃度胰島素組細(xì)胞GLUT4均在加入胰島素15分鐘后達(dá)到最大易位，且以后的45分鐘胞膜上的GUJT4的熒光強(qiáng)度與15分鐘時(shí)無(wú)差異(P>0.05)。 結(jié)論： 1．正常腎小球系膜細(xì)胞有GLUT4表達(dá)，胰島素可刺激系膜細(xì)胞GLUT4易位。 2．高糖明顯抑