慢性粒細胞白血病cyclin D2的表達研究.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文慢性粒細胞白血病cyclin D2的表達研究姓名：宋俊敏申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)（血液病學(xué)）指導(dǎo)教師：徐世榮2002.3.1中文摘要胞模型以及對照模型中的表達。以堿裂解法大量擴增表達抗A B L 蛋白酪氨酸激酶區(qū)胞內(nèi)單克隆抗體的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體 M S C V ．i b ．I R E S ．e G F P 以及對照載體M S C V ．I R E S ．e G F P 。采用聚已二醇沉淀法純化提取的質(zhì)粒。采用

2、P C L ．A m p h o 質(zhì)?？焖俎D(zhuǎn)染系統(tǒng)，共轉(zhuǎn)染2 9 3 k j包裝細胞系，將獲得的病毒上清轉(zhuǎn)導(dǎo)K 5 6 2 細胞系，建立了表達抗A B L 蛋白酪氨酸激酶胞內(nèi)單克隆抗體的K 5 6 2 ．i b ．e G F P 細胞模型。同時，采取同樣方法建立對照模型K 5 6 2 ．e G F P 。通過合成胞內(nèi)抗體特異性引物，以P C R的方法，檢測胞內(nèi)抗A B L 蛋白單克隆抗體的表達。以免疫印跡法檢測K 5 6 2 ，K 5

3、6 2 ．i b —e G F P 及K 5 6 2 ．e G F P 細胞中B C R ．A B L 及c —A B L 蛋白的表達，以P T K 特異性底物R R - S R C 法檢測抗體模型中B C R - A B L 及c ．A B L 蛋白酪氨酸激酶活性的變化。以半定量逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈( R T —P C R )法檢測K 5 6 2 細胞、K 5 6 2 ．i b —e G F P 細胞、K 5 6 2 一e G F P 細

4、胞以及1 5 例C M L 患者骨髓細胞、1 2 例正常人骨髓標本中c y c l i nD 2 m R N A 的表達。以免疫印跡法檢測K 5 6 2 細胞、K 5 6 2 ．i b ．e G F P 細胞、K 5 6 2 ．e G F P 細胞c y c l i n D 2 蛋白質(zhì)表達。以流式細胞術(shù)間接免疫熒光標記法檢測上述標本c y c l i nD 2 蛋白質(zhì)水平的變化。應(yīng)用F A C Sc a l i b u r 流式細胞儀，

5、c e l l q u e s t 軟件，分析K 5 6 2 細胞、K 5 6 2 ．i b ．e G F P 細胞以及K 5 6 2 ．e G F P 細胞周期分布以及c y c l i n D 2 細胞周期時相性表達。結(jié)果：以R T ．P C R 法，在人C M L 原代造血干祖細胞模型中能檢測到c y c l i n D 2 基因的表達，在轉(zhuǎn)染空載體M S C V —e G F P 的臍血C D 3 4 + - e G F P 細