歐洲型豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染性cDNA克隆的構(gòu)建.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(porcinereproductiveandrespiratorysyndrome，PRRS)是一種以母豬繁殖障礙和仔豬呼吸道疾病為特征的傳染病。其病原豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSvirus，PRRSV)分為兩個(gè)基因型，分別是以在歐洲分離的Lelystad株(LV株)為代表的歐洲基因型(Ⅰ型)和在北美分離的VR2332株為代表的北美基因型(Ⅱ型)。PRRSV為有囊膜的單股正義RNA病毒，其基因組大小為15.5kb

2、左右，包含9個(gè)開(kāi)放閱讀框，屬于套式病毒目(OrderNidovirales)、動(dòng)脈炎病毒科(Arteriviridae)成員。中國(guó)自1995年爆發(fā)PRRS以來(lái)，該病已經(jīng)遍及全國(guó)，成為對(duì)養(yǎng)豬業(yè)危害最為嚴(yán)重的疫病之一，給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。國(guó)內(nèi)自1996年首次分離到PRRSV，已經(jīng)有數(shù)株北美型PRRSV基因組全序列和部分序列發(fā)表的報(bào)道，但未見(jiàn)有歐洲型PRRSV流行。然而，近來(lái)國(guó)內(nèi)有報(bào)道稱從臨床病料中通過(guò)RT-PCR方法檢測(cè)到了歐洲型

3、PRRSV的存在。 國(guó)內(nèi)曾經(jīng)廣泛使用過(guò)歐洲型PRRSV(AMERVAC-PRRS/A3)弱毒疫苗，為了研究歐洲型弱毒疫苗株P(guān)RRSV與病料中檢測(cè)出的歐洲型PRRSV的關(guān)系，應(yīng)用RT-PCR方法分5段擴(kuò)增了歐洲型豬繁殖與呼吸綜合征(PRRSV)活疫苗AMERVAC-PRRS/A3弱毒株的全基因組，擴(kuò)增產(chǎn)物分別克隆入pCRBluntⅡ-TOPO載體中，并測(cè)序。結(jié)果表明，該弱毒株基因組序列全長(zhǎng)為15098bp，不包括poly(A)尾。

4、通過(guò)該序列與相關(guān)PRRSV序列同源性比較，結(jié)果顯示Ningbo42株ORF7基因(EF473137)核苷酸同源性為100％，F(xiàn)J0603株NSP2基因(EF592535)核苷酸同源性為98％。我國(guó)所檢測(cè)到的歐洲型PRRSVRT-PCR陽(yáng)性樣品很可能與歐洲型PRRSV弱毒疫苗的使用有關(guān)。 為了進(jìn)一步解析歐洲型PRRSV的復(fù)制過(guò)程及調(diào)控機(jī)制，我們構(gòu)建了AMERVAC-PRRS/A3株P(guān)RRSV的感染性cDNA克隆。首先將病毒基因組R