豬繁殖與呼吸綜合征病毒HB-XL株感染性cDNA克隆的構(gòu)建及病毒拯救.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的一種高度傳染性疾病。為從病毒學(xué)角度探討我國PRRSV的分子致病機制，本論文從河北省新樂市某爆發(fā)豬繁殖與呼吸綜合征病的豬場中分離出一株P(guān)RRSV HB-XL，并對其進(jìn)行完整基因組測序和分析，揭示該毒株的基因型、基因組特征及遺傳變異特點，應(yīng)用反向遺傳操作技術(shù)，成功構(gòu)建出PRR

2、SV HB-XL株的全長感染性cDNA克隆，并拯救出病毒，系統(tǒng)分析了拯救病毒的生物學(xué)特性，為進(jìn)一步深入研究和闡明PRRSV的分子致病機制，構(gòu)建動脈炎病毒載體和新型基因工程疫苗提供科學(xué)依據(jù)。
　　從河北省新樂市某豬場采集疑似感染豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)的病料，通過Marc-145細(xì)胞傳代培養(yǎng)，RT-PCR檢測等方法鑒定，確認(rèn)分離到一株P(guān)RRSV，命名為HB-XL株（登錄號KP162169）。進(jìn)一步對其全基因組進(jìn)行克隆測序

3、，經(jīng)同源性比較及系統(tǒng)進(jìn)化樹等分析，表明該毒株屬于美洲型PRRSV，且與國內(nèi)流行的高致病性毒株遺傳關(guān)系較近。與經(jīng)典美洲株相比，該毒株非結(jié)構(gòu)蛋白Nsp2發(fā)生30個不連續(xù)氨基酸缺失;其ORF5編碼的GP5蛋白的第13位、151位氨基酸均為具有強毒特性的精氨酸(R)，第137位為具有野毒特性的絲氨酸(S);其Nsp2和ORF5基因的獨特變異表明該毒株可能是疫苗重組毒株，且較低的致病力和死亡率說明該毒株毒力較弱，說明HB-XL株有可能發(fā)展為疫苗株

4、的備選毒株。
　　運用反向遺傳操作技術(shù)，構(gòu)建豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV) HB-XL株的全長cDNA克隆，并拯救出病毒，命名為RvHB-XL。對拯救病毒的鑒定結(jié)果表明，RvHB-XL能在MARC-145細(xì)胞引起典型的PRRSV細(xì)胞病變(CPE);拯救病毒的遺傳標(biāo)記能夠穩(wěn)定遺傳。病毒生長特性結(jié)果顯示，RvHB-XL拯救病毒與親本病毒在Marc-145細(xì)胞上具有相似的增殖特性。PRRSV HB-XL感染性克隆的成功構(gòu)建為進(jìn)一步