重組腺相關(guān)病毒2-8制備系統(tǒng)的建立及間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)卵巢癌趨化作用的研究.pdf

1、腺相關(guān)病毒8(adeno-associate.viru.8，AAV8)是2002年在猿猴中分離得到的一類新型腺相關(guān)病毒載體，相對(duì)常用的AAV2具有更高的感染效率，更穩(wěn)定持久的表達(dá)時(shí)間，且免疫原性更低，感染后表達(dá)迅速。2004年Blood報(bào)道AAV8在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中已被成功用于血友病A的基因治療。2007年，闡明了AAV8的晶體結(jié)構(gòu)。目前AAV8的研究受到了各國(guó)科學(xué)家的重視，應(yīng)用AAV8來(lái)治療各種惡性腫瘤也成了基因治療領(lǐng)域研究的一個(gè)新熱點(diǎn)。然

2、而，目前對(duì)于AAV8的研究還不成熟，AAV8的制備相對(duì)AAV2要繁瑣和困難，只是在幾家國(guó)外實(shí)驗(yàn)室做得比較出色，在國(guó)內(nèi)做的也很不成熟，因而大大限制了AAV8的推廣和利用。我們想通過(guò)這個(gè)課題來(lái)研究并建立相對(duì)較好的重組腺相關(guān)病毒2/8(recombinantadeno-associate.viru.2/8，rAAV2/8)的制備系統(tǒng)。
　　 另外，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bon.marrow-mesenchyma.ste.cell，MSC)

3、，是存在于骨髓中的非造血性干細(xì)胞，近年來(lái)的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)表明MSC能高度靶向遷移到腫瘤組織，而且在臨床上MSC已成功應(yīng)用于造血移植，具有較好的安全性，因而MSC在腫瘤的靶向性細(xì)胞治療的應(yīng)用上引起了廣泛的關(guān)注，成為非常有前景的一類干細(xì)胞治療載體。2008年的Ste.cells和Gen.therapy上分別報(bào)道了利用MSC治療肺轉(zhuǎn)移性的黑素瘤和前列腺癌。為此，我們做了MSC對(duì)卵巢癌體內(nèi)趨化作用的實(shí)驗(yàn)，想在下一步實(shí)驗(yàn)中聯(lián)合rAAV2/8和MSC來(lái)

4、做靶向基因治療的研究。
　　 以此為理論基礎(chǔ)，我們構(gòu)建并鑒定了包裝rAAV2/8的三質(zhì)粒pSH3-D(輔助質(zhì)粒)、p5E18-VD286(包裝質(zhì)粒)和AAV-neo-eGFP(載體質(zhì)粒)，穩(wěn)定和優(yōu)化了三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染的聚乙烯亞胺(PEI)沉淀法，在HEK293細(xì)胞系中成功重組包裝出了攜帶有eGFP基因的rAAV2/8，建立了較為穩(wěn)定的rAAV2/8病毒的制備系統(tǒng)。在MSC趨化卵巢癌的實(shí)驗(yàn)中，我們首先用10只Balb/c裸鼠注射人SK