益氣養(yǎng)陰法對(duì)IgA腎病大鼠AT1和Ⅳ型膠原的影響.pdf

1、目的:IgA腎病(IgAN)是世界范圍內(nèi)常見(jiàn)的原發(fā)性腎小球疾病，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)15％～20％的患者在確診后10年內(nèi)、30％～35％的患者在確診后20年內(nèi)進(jìn)入終末期腎衰竭，嚴(yán)重威脅著患者的身心健康。IgAN在我國(guó)發(fā)病率較高，其臨床表現(xiàn)多樣，以反復(fù)發(fā)作性血尿?yàn)橹饕攸c(diǎn)，可伴有蛋白尿、高血壓等。IgAN的診斷目前主要是依靠病理檢查并結(jié)合血尿、蛋白尿等臨床表現(xiàn)，其病理特征主要包括腎小球系膜區(qū)多聚IgA1分子伴少量C3、IgM、IgG沉積及系膜細(xì)

2、胞增殖、系膜基質(zhì)的增多。關(guān)于其發(fā)病機(jī)制仍然知之甚少，許多學(xué)者認(rèn)為其是多種因素綜合作用的結(jié)果。近年來(lái)，細(xì)胞因子的作用引起人們的關(guān)注，研究發(fā)現(xiàn)腎臟局部的RAS系統(tǒng)激活，可以刺激系膜細(xì)胞增殖、系膜基質(zhì)增寬及細(xì)胞外基質(zhì)的合成，在IgAN的進(jìn)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用。目前IgAN的治療僅限于對(duì)癥支持及免疫抑制等治療，因此發(fā)現(xiàn)有效的特異性治療方案成為研究熱點(diǎn)。因此我們提出“益氣養(yǎng)陰法”治療IgAN，應(yīng)用于臨床上后取得了不錯(cuò)的治療效果，但其具體的治療作用

3、機(jī)制仍然不是很清楚。
　　本文首先建立IgAN動(dòng)物模型，應(yīng)用益氣養(yǎng)陰中藥按照相應(yīng)的藥物劑量進(jìn)行干預(yù)治療。通過(guò)觀察大鼠24小時(shí)尿蛋白定量、尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、腎功能等，同時(shí)檢測(cè)血清中AngⅡ的水平及腎組織AT1、Ⅳ型膠原的表達(dá)情況，旨在探討益氣養(yǎng)陰中藥治療IgA腎病的作用機(jī)制及藥物作用靶點(diǎn)。
　　方法:40只雄性清潔級(jí)SD大鼠被選入實(shí)驗(yàn)。我們將這40只大鼠隨機(jī)分成正常對(duì)照組10只、模型組10只、貝那普利組10只、中藥組10只。除正常

4、對(duì)照組外的后三組均運(yùn)用BSA、脂多糖、蓖麻油、四氯化碳復(fù)制IgAN大鼠動(dòng)物模型。具體方法如下:將免疫原BSA用蒸餾水配制成100g/L濃度，隔天灌胃，劑量為400mg/kg，持續(xù)8周;每周一次皮下注射四氯化碳0.1ml、蓖麻油0.3ml，連續(xù)9周;并于第六周尾靜脈注射脂多糖0.05mg。正常對(duì)照組給予相同劑量的蒸餾水隔日灌胃8周;每周一次皮下注射生理鹽水0.4ml;第六周尾靜脈注射生理鹽水0.2ml。然后從第10周起，貝那普利組、中藥組

5、分別予以鹽酸貝那普利、中藥灌胃，正常對(duì)照組、模型組予以等量生理鹽水灌胃，持續(xù)8周。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，我們將大鼠置于代謝籠內(nèi)分別于實(shí)驗(yàn)的各個(gè)時(shí)間點(diǎn)留取尿液標(biāo)本，測(cè)定尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)及24小時(shí)尿蛋白定量。實(shí)驗(yàn)第17周末，麻醉動(dòng)物，留取血液標(biāo)本，迅速采集大鼠腎臟標(biāo)本。血液標(biāo)本離心后用半自動(dòng)生化儀測(cè)定大鼠腎功能及放射免疫法測(cè)定血清中AngⅡ的水平。最后，于光鏡、電鏡下觀察大鼠腎臟組織病理形態(tài)學(xué)改變，免疫熒光法檢測(cè)大鼠腎臟IgA免疫復(fù)合物沉積，免疫組織化學(xué)

6、技術(shù)檢測(cè)Ⅳ型膠原的表達(dá)情況，RT-PCR技術(shù)檢測(cè)AT1的基因表達(dá)水平。
　　結(jié)果:模型組、貝那普利組、中藥組大鼠ATI基因表達(dá)較正常組明顯升高(P＜0.01)，貝那普利組、中藥組大鼠這個(gè)指標(biāo)的表達(dá)較模型組有所降低(P＜0.01)，貝那普利組、中藥組間無(wú)明顯區(qū)別。
　　正常組大鼠Ⅳ型膠原主要在腎小球及腎小管基底膜表達(dá)，系膜區(qū)、腎間質(zhì)幾乎不表達(dá);模型組、貝那普利組、中藥組大鼠較正常組Ⅳ型膠原的表達(dá)明顯增多，可見(jiàn)其在系膜區(qū)表達(dá)明顯

7、升高;貝那普利組、中藥組較模型組表達(dá)較模型組降低，兩者之間無(wú)明顯差異。
　　結(jié)論:
　　1.益氣養(yǎng)陰中藥可以降低IgA腎病大鼠尿蛋白及尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，從而保護(hù)腎功能;
　　2.益氣養(yǎng)陰中藥可以顯著改善IgA腎病大鼠腎小球上皮細(xì)胞足突的融合、系膜細(xì)胞的增生及系膜基質(zhì)的增寬等病理?yè)p害;
　　3.模型組大鼠血清中AngⅡ水平、腎臟局部AT1mRNA的表達(dá)明顯增加，提示腎臟局部RAS系統(tǒng)的激活在IgAN的進(jìn)展中起重要作用。