肝癌中miR-203,miR-126的表達及miR-126的功能研究.pdf

1、目的:課題組前期對接受肝移植手術(shù)的肝癌患者腫瘤組織進行microRNA表達譜分析,發(fā)現(xiàn)術(shù)后發(fā)生肝癌復發(fā)的的患者相對于未復發(fā)者miR-203、miR-126表達明顯下調(diào)。本研究在此基礎(chǔ)上,擴大肝癌組織樣本對miR-203、miR0126表達進一步驗證,研究miR0126在肝癌轉(zhuǎn)移過程中的功能作用,并對miR-126影響肝癌轉(zhuǎn)移的機制作初步探討。
　　方法:1.TaqMan探針法Real-time PCR檢測miR-203、miR-1

2、26在68例肝癌中的表達,綜合分析患者臨床病理資料和隨訪信息,探討miR-203、miR-126表達水平與肝癌臨床病理特征及患者預后的關(guān)系。2.構(gòu)建miR-126過表達慢病毒載體,病毒侵染肝癌SMMC-7721細胞,通過細胞遷移與侵襲實驗、細胞凋亡檢測、MTT實驗和軟瓊脂克隆形成實驗研究miR-126對SMMC-7721細胞體外惡性生物學行為的影響;裸鼠皮下成瘤實驗觀察miR-126對SMMC-7721細胞體內(nèi)成瘤能力的影響,裸鼠尾靜脈

3、注射建立肺轉(zhuǎn)移模型分析miR-126對SMMC-7721細胞體內(nèi)轉(zhuǎn)移能力的影響。3.通過Liver Cancer PCR Array芯片了解miR-126對SMMC-7721細胞中肝癌相關(guān)基因表達的影響,初步探討miR-126影響肝癌轉(zhuǎn)移的機制。
　　結(jié)果:1.Real-time PCR結(jié)果表明miR-203、miR-126表達水平在移植術(shù)后肝癌復發(fā)組與未復發(fā)組有明顯差異(p＜0.05),相對于未復發(fā)組兩者在肝癌復發(fā)組均表達下調(diào)。

4、根據(jù)ROC曲線確定分類點,按照miR-203和miR-126表達水平將患者分為高表達組和低表達組。卡方檢驗表明miR-203和miR-126表達水平與患者年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目、術(shù)前AFP水平等臨床病理特征無明顯相關(guān)性。Kaplan-Meier生存分析表明miR-203和miR-126的低表達預示較低的總生存率和較高的腫瘤復發(fā)率(p＜0.05)。2.成功構(gòu)建miR-126過表達慢病毒載體,病毒侵染肝癌SMMC-7721細胞進行體

5、內(nèi)、外功能實驗。Transwell小室實驗表明,miR-126過表達能降低肝癌細胞遷移和侵襲能力;流式細胞術(shù)分析發(fā)現(xiàn)miR-126過表達促進肝癌細胞凋亡;軟瓊脂克隆形成實驗表明miR-126過表達減少肝癌細胞集落形成數(shù)目;MTT實驗顯示過表達miR-126明顯抑制SMMC-7721細胞增殖;體內(nèi)試驗表明過表達miR-126的肝癌細胞在裸鼠皮下成瘤體積及重量均明顯小于對照組,尾靜脈注射過表達miR-126的肝癌細胞在肺臟形成轉(zhuǎn)移灶的比例明

6、顯小于對照組。3.Liver Cancer PCR Array芯片結(jié)果表明過表達miR.126能抑制SMMC-7721細胞中EGFR、PTGS2等基因的表達,但具體機制尚需進一步研究。結(jié)論:1.miR-203、miR-126在肝癌中低表達預示移植術(shù)后較低的總生存率和較高的腫瘤復發(fā)率,提示miR-203和miR-126可作為肝癌肝移植病人預后的有效指標。2.miR-126在體內(nèi)、外實驗中能抑制肝癌轉(zhuǎn)移,有助于闡明肝癌進展的分子機制,為提供