變異鏈球菌生長及生物膜形成能力的初步研究.pdf

1、齲病是常見的口腔感染性疾病之一，而變異鏈球菌是人類的主要致齲菌，它通過在牙齒表面的黏附和聚集形成生物膜，進(jìn)而產(chǎn)酸耐酸致齲。因此研究其生長特性及生物膜結(jié)構(gòu)能更好的研究齲病發(fā)病機(jī)理。近年來，隨著科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步，對生物膜的研究也越來越深入。激光共聚焦顯微鏡與傳統(tǒng)的電鏡相比，前者不但可以保持生物膜的完整結(jié)構(gòu)，而且可沿水平、垂直方向斷層掃描，進(jìn)行三維重建，使人們可以從不同的角度來分析生物膜的結(jié)構(gòu)特性。但是由于其樣本需經(jīng)熒光標(biāo)記或染色，使實驗時

2、間明顯延長，于是報告基因技術(shù)用于細(xì)菌形態(tài)學(xué)研究的優(yōu)勢便得以體現(xiàn)。細(xì)菌通過轉(zhuǎn)入的熒光蛋白自身發(fā)光，不需染色就可在鏡下動態(tài)實時的觀察。
　　本實驗比較研究變異鏈球菌熒光報告株與野生菌株的生長能力和生物膜形成能力，結(jié)果顯示二者無明顯差異。隨后研究在激光共聚焦顯微鏡下，報告株在樹脂，玻璃離子表面形成生物膜的差異，為臨床修復(fù)材料的選擇提供了依據(jù)。本研究共包括三個實驗。
　　實驗一：變異鏈球菌熒光報告株與野生菌株生長能力的比較
　

3、　將復(fù)蘇后的變異鏈球菌，變異鏈球菌熒光報告株調(diào)至相同的光密度值，37℃厭氧箱培養(yǎng)。于0，1.5，3，4，6，8，10，12，16，20，24h取培養(yǎng)液，酶標(biāo)儀測OD600值。繪制生長曲線，結(jié)果兩者生長趨勢相近，提示兩者具有相同的生長狀態(tài)。
　　實驗二：變異鏈球菌熒光報告株與野生菌株生物膜形成能力的比較
　　在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中培養(yǎng)變異鏈球菌熒光報告株及野生株，分別于培養(yǎng)后4h,8h,12h,24h取樣，將生物膜用結(jié)晶紫染色，

4、無水乙醇脫色，酶標(biāo)儀測OD575。組間比較發(fā)現(xiàn)兩菌株生物膜形成量無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)。
　　在蓋玻片上培養(yǎng)上述二菌，分別培養(yǎng)4h，8h,12h，24h取樣，通過洗滌、固定、脫水、干燥和噴金處理后，SEM下觀察。結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同時間段兩者的生物膜形態(tài)沒有明顯差異，都是由早期散在分布，少量交聯(lián)；到后期成團(tuán)、成膜分布、各個菌落融合并重疊，形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。高倍鏡下細(xì)菌形態(tài)也未見改變。提示兩者生物膜形態(tài)相似。
　　實驗三：變異鏈球菌