延胡索醇提物和延胡索生物堿體內抗血管生成及其對VEGF調控作用的實驗研究.pdf

1、[目的]：
　　 探討延胡索醇提物及延胡索生物堿體內抗血管生成的作用及對VEGF的調控作用。
　　 [方法]:
　　 1．利用MTT法，檢測延胡索醇提物及延胡索生物堿對人胃癌細胞株BGC-823、人肺腺癌細胞株A549、人結腸癌細胞株LOVO以及人肝癌細胞株HepG-2的增殖抑制作用，篩選最敏感腫瘤細胞株；
　　 2．以最敏感腫瘤細胞株為對照，利用MTT法測定延胡索醇提物及延胡索生物堿對人臍靜脈血管內皮細

2、胞(HUVEC)的增殖抑制作用；
　　 3．通過建立雞胚尿囊膜(CAM)模型，觀察延胡索醇提物及延胡索生物堿在體內對新生血管的抑制作用；
　　 4．采用WesternBlot法觀察并比較延胡索醇提物及延胡索生物堿對A549細胞、HUVEC細胞VEGF表達的影響；并觀察延胡索生物堿對AKT，MAPK,NF-κB信號通路的影響。
　　 [結果]:
　　 1．延胡索醇提物及延胡索生物堿在12.5μg/ml～20

3、0μg/ml濃度范圍內對HepG2、A549、LOVO以及BGC-823細胞均有一定的增殖抑制作用。延胡索醇提物作用于以上四種腫瘤細胞后IC50分別為：167.845μg/ml，153.078μg/ml，158.894μg/ml，155.865μg/ml;而延胡索生物堿作用四種細胞后的IC50分別為：89.971μg/ml,45.672μg/ml，109.187μg/ml以及62.62μg/ml。即延胡索醇提物及延胡索生物堿對人肺腺癌A

4、549細胞最為敏感。
　　 2．延胡索醇提物在3.125μg/ml～25μg/ml濃度范圍對A549細胞的增殖抑制率為6.77％～23.94%之間，同樣條件下作用于HUVEC48h后，抑制率在16.94%～42.6%之間；延胡索生物堿在3.125μg/ml～25μg/ml濃度范圍內作用于A549細胞48h后的增殖抑制率在10.22%～36.15%之間，相同濃度范圍的延胡索生物堿作用HUVEC48h后，抑制率在19.03%～49.

5、94%之間。即延胡索醇提物和延胡索生物堿在相同濃度下，對HUVEC細胞的增殖抑制作用要優(yōu)于對A549的增殖作用，P值均＜0.05，具有統(tǒng)計學意義，故而認為延胡索醇提物和延胡索生物堿對A549細胞和HUVEC細胞體外增殖存在差異細胞毒作用。
　　 3．延胡索醇提物3.125μg/ml～25μg/ml濃度范圍內對雞胚絨毛尿囊膜新生血管的抑制率在8.68%～25.2%之間，延胡索生物堿在3.125μg/ml～25μg/ml濃度范圍內對

6、雞胚尿囊膜的新生血管的抑制率在19.32%～50.2%之間。故而，認為延胡索生物堿在體內具有較好的抗血管生成的作用，而在相同條件下，延胡索醇提物對雞胚絨毛尿囊膜的新生血管抑制作用相對較弱。
　　 4．延胡索生物堿可下調A549細胞VEGF的蛋白表達水平，在50μg/ml時即可降低VEGF的表達水平。而在相同條件下，延胡索醇提物對VEGF蛋白表達并無明顯影響。延胡索生物堿在12.5μg/ml～200μg/ml濃度范圍對A549細胞

7、中NF-κB信號通路上的p65，p50，IκB-a的蛋白水平以及IκB-a的磷酸化水平均無明顯的影響；而在200μg/ml時可降低Akt蛋白磷酸化水平，其磷酸化的水平與對照組相比可以較明顯的降低；對MAPK3s途徑中Erk、P38、JNK信號通路上的Erk、P38、JNK的蛋白及其磷酸化水平并無明顯影響。
　　 在亞細胞毒作用濃度范圍3.125μg/ml～25μg/ml的延胡索醇提物對HUVEC細胞VEGF表達無明顯影響，而在同

8、樣的條件下，延胡索生物堿可顯著抑制其VEGF的表達水平，在12.5μg/ml時即可降低其表達，并呈現(xiàn)出劑量依賴性。
　　 [結論]：
　　 延胡索生物堿在體外對HepG2細胞、A549細胞、LOVO細胞、BGC-823細胞均具有較強的增殖抑制作用，而延胡索醇提物體外對四種腫瘤細胞的增殖抑制作用相對較弱；延胡索醇提物及延胡索生物堿體內均具有一定的抗血管生成作用；延胡索生物堿可降低A549細胞和HUVEC細胞中VEGF的表達