黃曲霉毒素B1轉(zhuǎn)化L02細胞差異基因表達譜的研究.pdf

1、目的：分析miRNA 在惡性轉(zhuǎn)化細胞中的表達差異，利用GINI 技術(shù)和基因芯片技術(shù)，初步篩選黃曲霉毒素作用L02細胞的基因靶點。
　　 方法：首先通過RT-PCR 技術(shù)確定L02細胞內(nèi)含有黃曲霉毒素B1的代謝活化酶CYP1A2，然后以黃曲霉毒素AFB1（終濃度1 μg/ml）作用正常生長的L02細胞一周，用軟瓊脂克隆實驗證實細胞已經(jīng)發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化，具有惡性細胞的特性。通過miRNA基因芯片技術(shù)檢測正常L02細胞和AFB1轉(zhuǎn)化細胞中

2、miRNA的基因表達差異。再根據(jù)GINI 技術(shù)的原理，用emetine 阻斷轉(zhuǎn)化細胞內(nèi)自我修復途徑——無意義介導的衰變(nonsense-mediated decay，NMD)，利用基因芯片技術(shù)比較加入emetine和未加入emetine的L02+AFB1細胞表達有差異的基因，在上調(diào)的基因中初步篩選AFB1可能作用的靶基因。
　　 結(jié)果：RT-PCR結(jié)果顯示L02細胞中有CYP1A2表達。miRNA 芯片分析顯示主要的上調(diào)基因為

3、has-miR-671-5p，下調(diào)基因為has-miR-96，他們都與蛋白合成、免疫系統(tǒng)、細胞生理功能密切相關(guān)，其中和腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)的靶mRNA和蛋白是IGF2，鋅指蛋白和早期未成熟密碼子。通過emitine 抑制NMD 途徑，在上調(diào)基因中發(fā)現(xiàn)TSC1基因、EphA2基因與癌癥發(fā)生密切相關(guān)。
　　 結(jié)論：黃曲霉毒素B1誘導人胚肝細胞L02發(fā)生了惡性轉(zhuǎn)化，其實基因表達譜產(chǎn)生差異。microRNA作用的靶基因與多種蛋白合成、免疫