大鼠脂肪干細胞向神經樣細胞分化的研究.pdf

1、第一部分，大鼠脂肪干細胞的獲取、增殖、傳代以及多向分化能力的檢測
　　目的：探索并固定大鼠脂肪干細胞獲得、增殖和傳代的方法和操作流程,并且通過誘導脂肪干細胞分化為成脂細胞、成骨細胞而證明脂肪干細胞的多向分化能力。
　　方法：取質量約120克的SD大鼠2只,性別不限,分離其腹股溝脂肪組織,將其剪碎并用濾網過濾,然后經一系列操作而將含有脂肪干細胞的培養(yǎng)液平鋪于25cm2培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),并進而增殖、傳代。之后,通過細胞流式分析檢測第

2、三代細胞表型證明其為脂肪干細胞。之后分別更換成脂誘導培養(yǎng)基和成骨細胞培養(yǎng)基,誘導脂肪干細胞定向分化為脂肪細胞和骨細胞。
　　結果：成功分離培養(yǎng)出脂肪干細胞,并能進行增殖和傳代。利用流式細胞技術檢測脂肪干細胞的CD34(+)、CD44(+)、CD45(-)、CD106(+),證明該細胞為脂肪干細胞。而向脂肪和成骨細胞誘導的細胞均發(fā)生了明顯變化,最后分別通過油紅O染色和堿性磷酸酶試劑盒證明脂肪干細胞分化為脂肪細胞和成骨細胞。
　

3、　結論：脂肪組織中存在脂肪干細胞,并能夠成功的分離、增殖和傳代。并且擁有多向分化能力。可以成功的誘導分化為脂肪細胞和成骨細胞。
　　第二部分，大鼠脂肪干細胞定向分化為神經樣細胞
　　目的：使用神經細胞誘導液將脂肪間充質干細胞定向誘導分化為神經樣細胞。
　　方法：首先是將第三代脂肪間充質干細胞在培養(yǎng)瓶中貼壁達到80％以上時消化,然后使其重新貼壁于六孔板中,細胞數量約為105級。然后用添加了bFGF和EGF以及B27的Ne

4、urobasal培養(yǎng)基培養(yǎng)六孔板中的細胞。每3天半量添加新的培養(yǎng)液,至5-7天左右就可以看到細胞增殖形成培養(yǎng)液中懸浮的細胞球。取誘導培養(yǎng)第7天的細胞球進行nestin的免疫熒光染色。最后,將培養(yǎng)好的細胞球吹散,離心,并將之培養(yǎng)在僅添加了B27的Neurobasal培養(yǎng)基中誘導分化10天,然后再進行NeuN、GFAP和β-tubulin熒光染色來鑒定分化成的細胞。
　　結果：在使用了含有bFGF和EGF以及B27的Neurobasa

5、l培養(yǎng)基誘導了5天時就出現了懸浮的細胞球,并且通過免疫熒光染色證明為nestin陽性,證明其為神經干細胞的細胞球。而在使用了僅添加了B27的Neurobasal培養(yǎng)基中誘導分化10天后,打散的細胞球細胞也分化成了神經細胞,并經過了MAP2ab、NeuN、GFAP和β-tubulin熒光染色鑒定,證明分化成了神經元和星形膠質細胞。
　　結論：經特定的誘導培養(yǎng)液誘導后,脂肪間充質干細胞可以被誘導分化為神經干細胞并且進一步分化為神經元和