缺氧誘導(dǎo)因子HIF-1α和HIF-2α在人腎癌中的表達(dá)及其功能的研究.pdf

1、復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文缺氧誘導(dǎo)因子HIF1α和HIF2α在人腎癌中的表達(dá)及其功能的研究姓名：徐可申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：泌尿外科指導(dǎo)教師：張?jiān)?0070410復(fù)旦大學(xué)博士論文缺氧誘導(dǎo)因子HIF1a和HIF2d在人腎癌中的表達(dá)及其功能的研究(摘要)腎癌是最常見的腎實(shí)質(zhì)惡性腫瘤，且發(fā)病率正在升高。腎癌生物學(xué)行為極為復(fù)雜，對(duì)放療和化療均不敏感，目前臨床上對(duì)于手術(shù)后患者和轉(zhuǎn)移性腎癌患者主要進(jìn)行免疫治療。但常用的白介素2(IL2)和干擾素噸(IF

2、Nn)單藥治療的抗腫瘤活性一般，疾病緩解大多不能持久，另外大劑量IL2的毒性相當(dāng)大，許多受試者不適合這種治療。低氧誘導(dǎo)因子HIF能增強(qiáng)其下游靶基因血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、葡萄糖轉(zhuǎn)錄因子一I(GLUTI)和糖酵解酶等基因的表達(dá)，促進(jìn)血管的生成和細(xì)胞能量代謝，其過度表達(dá)在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中可能扮演著重要的角色。本課題首先應(yīng)用RTPCR和WesternBlot方法檢測(cè)腎細(xì)胞癌組織和人腎癌細(xì)胞株7860以及OSRC2中缺氧誘導(dǎo)因子H

3、1FIa和mF2Ⅱ在基因轉(zhuǎn)錄水平和蛋白質(zhì)水平上的表達(dá)情況，探討了HIFIⅡ和HIF2a與腎細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展過程的相關(guān)性。進(jìn)一步構(gòu)建了能夠穩(wěn)定表達(dá)H1FIQ和mF2Ⅱ基因的真核質(zhì)粒，并轉(zhuǎn)染入人腎癌細(xì)胞株7860以及OSRC2中。采用化學(xué)合成法設(shè)計(jì)合成小干擾RNA(siRNA)，對(duì)轉(zhuǎn)染入細(xì)胞株中的H1F基因進(jìn)行RNA干擾，明確合成的siRNA在基因和蛋白水平均能夠有效抑制HIF的表達(dá)。在此基礎(chǔ)上，通過Ml“r方法檢測(cè)其對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的影響，免

4、疫組化方法研究其對(duì)HIF下游基因ⅦGF等的影響。然后將裸鼠接種腎癌細(xì)胞和RNA干擾后的腎癌細(xì)胞，了解HIF基因?qū)τ谥铝鲂缘挠绊?。本課題采用RNA干擾方法研究缺氧誘導(dǎo)因子HIFId和HIF2Ⅱ?qū)δI癌細(xì)胞增殖和腫瘤生長的影響，為腎細(xì)胞癌的基因治療提供了一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。第一部分HIF1Ⅱ和HIF2Q在腎細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義目的：探討低氧誘導(dǎo)因子HIF1Q和H1F2a在腎透明細(xì)胞癌組織和人腎癌細(xì)胞7860和OSRC2中的表達(dá)及其臨床意義。方法：