2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的: 第一部分:通過構(gòu)建與增生性病變相關(guān)基因NYD-SP15的原核表達質(zhì)粒,體外誘導(dǎo)NYD-SP15蛋白的表達,免疫小鼠獲得抗體,并把獲得的多克隆抗體運用于增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變的免疫組化研究。 第二部分:研究Lims基因在PVR發(fā)生過程中RPE細胞發(fā)育中的作用。 方法: 第一部分:應(yīng)用PCR技術(shù)擴增NYD-SP15全長開放閱讀框,構(gòu)建PET28a-NYD-SP15載體,再將其轉(zhuǎn)入表達菌株, IPTG誘

2、導(dǎo)表達,Ni柱純化,免疫BALB/C小鼠,Western-blot法檢測純化的蛋白和抗體,取視網(wǎng)膜增殖膜臨床標本,抗體行免疫組化染色。 第二部分:應(yīng)用巢式RT-PCR,以小鼠cDNA為模板,擴增Lims基因不同剪切子,構(gòu)入PinPointTM Xa-1P質(zhì)粒,測序鑒定。 結(jié)果: 第一部分:成功地構(gòu)建了PET28a-NYD-SP15原核表達質(zhì)粒,并獲得了高效表達NYD-SP15的BL21菌株,表達的His標簽融合蛋

3、白,分子量為58KD左右,經(jīng)免疫小鼠獲得了抗NYD-SP15抗體。經(jīng)Western-blot法分析,抗體為NYD-SP15特異性抗體。免疫組化染色顯示,NYD-SP15基因表達于視網(wǎng)膜色素上皮細胞的胞漿,呈現(xiàn)棕色染色。第二部分:測序表明克隆了新的Lims基因變異剪切體Lims E,該變異剪切體編碼區(qū)為1164 bp,編碼387個氨基酸。 結(jié)論: 第一部分:構(gòu)建的NYD-SP15基因的原核表達載體,體外高效表達蛋白,免疫小

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