COX-2與胃癌耐藥基因LRP、GCS、GST-π的關(guān)系的研究.pdf

1、研究背景：化療（Chemotherapy）是綜合治療胃癌的重要手段，但腫瘤多藥耐藥（Multidrug Resistance，MDR）限制了化療藥物的進(jìn)一步應(yīng)用。研究MDR的發(fā)生及影響機(jī)制，對(duì)指導(dǎo)臨床合理化療有重要的意義。MDR的產(chǎn)生機(jī)制較為復(fù)雜，其中耐藥基因的激活與表達(dá)增加，被認(rèn)為是MDR的主要原因。肺耐藥蛋白（lung resistance protein,LRP）、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶-π（ glutathione S transfer

2、ase pi,GST-π）及葡萄糖神經(jīng)酰胺合成酶（glucosylceramide synthase,GCS）是三種常見的多藥耐藥基因，在胃癌組織或胃癌細(xì)胞株中有較高表達(dá)，被認(rèn)為是引起胃癌多藥耐藥的重要基因。有研究表明，環(huán)氧合酶2(cyclooxygenase 2，COX-2)參與腫瘤多藥耐藥的發(fā)生，而選擇性COX-2抑制劑（cyclooxygenase 2 inhibitors ,COXIBs）可以增加腫瘤對(duì)化療藥物的敏感性，其具體機(jī)

3、制尚不清楚。以COX-2為靶點(diǎn)逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥成為目前這一領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。
　　 目的：研究COX-2與胃癌耐藥基因LRP、GCS、GST-π在胃癌組織中的表達(dá)及其相關(guān)性；用選擇性COX-2抑制劑干預(yù)胃癌細(xì)胞株生長，觀察其對(duì)胃癌細(xì)胞株三種耐藥基因表達(dá)的影響，探討COX-2參與胃癌多藥耐藥的機(jī)制，為臨床使用COX-2抑制劑逆轉(zhuǎn)胃癌耐藥提供實(shí)驗(yàn)理論依據(jù)。
　　 方法：收集安徽省立醫(yī)院2008年6月至2008年10月經(jīng)外科手術(shù)切除

4、并被病理證實(shí)的胃腺癌組織標(biāo)本63例，所有患者術(shù)前未接受任何形式的放化療，并收集同期手術(shù)切除并被病理證實(shí)的非癌性胃組織30例作為對(duì)照，用免疫組化方法觀察COX-2及LRP、GCS、GST-π在胃癌和非癌性胃組織中的表達(dá)情況，并對(duì)COX-2及LRP、GCS、GST-π在胃癌組織中的表達(dá)進(jìn)行相關(guān)性分析；另外，用選擇性COX-2抑制劑塞來昔布干預(yù)胃癌細(xì)胞株（SGC-7901）培養(yǎng)，同時(shí)不加任何干預(yù)措施培養(yǎng)SGC-7901細(xì)胞株作為對(duì)照，ELIS

5、A法檢測各組胃癌細(xì)胞株中三種耐藥蛋白表達(dá)的含量，并用t檢驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行分析，研究塞來昔布對(duì)胃癌細(xì)胞株耐藥基因表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果：1）胃癌組織免疫組化結(jié)果：在胃癌組織中COX-2、LRP、GST-π及GCS的表達(dá)均高于非胃癌組織，其陽性表達(dá)率分別為87.3％與36.7％；66.7％與 42.9％；63.5％ 與40.0％；49.2％ 與23.3％(均P＜0.05)。在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中COX-2陽性表達(dá)率高于無淋巴

6、結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織(100％與69.2％，P＜0.05)，在不同年齡、性別、不同分化程度、不同的癌腫浸潤深度組別中COX-2的陽性表達(dá)率無明顯差異；LRP、GST-π、GCS在胃癌組織中的陽性表達(dá)率與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、年齡、性別、分化程度、不同的侵犯深度等均無明顯關(guān)系。胃癌組織中COX-2與LRP（r=0.337，P=0.007），COX-2與GST-π（r=0.301，P=0.015），COX-2與GCS （r=0.394，P=0.004

7、）的表達(dá)均具有相關(guān)性，而LRP與GST-π（r=0.233，P=0.066），LRP與GCS（r=0.225,P=0.077）GST-π與GCS （r=0.153,P=0.232）的表達(dá)則無明顯相關(guān)性。
　　 2）ELISA結(jié)果：在正常胃癌細(xì)胞株中SGC-7901中LRP、GST-π、GCS三種耐藥基因均有表達(dá)，其蛋白含量分別為83.76±7.20 ng/ml、41.46±1.85ng/ml、11.56±0.76ng/ml。經(jīng)不

8、同劑量的塞來昔布處理胃癌細(xì)胞株，與對(duì)照組相比：LRP在低、中、高劑量（LD，MD，HD）組的含量均較對(duì)照組有明顯下降（分別為73.78±6.83 ng/ml，t=2.465,P＜0.05；56.95±3.62 ng/ml，t=8.153,P＜0.01；36.49±4.16 ng/ml，P＜0.01），MD與LD組的含量相比有明顯差別（t=5.330,P＜0.01），HD組與LD、MD組含量也有差別（分別t=11.413,P＜0.01；t

9、=9.080,P＜0.01）；GST-π在LD、MD、HD三組的含量也均較對(duì)照組有明顯下降（分別為36.88±2.50 ng/ml，t=3.610,P＜0.01；30.61±1.98 ng/ml，t=9.821,P＜0.01；22.35±2.96ng/ml，P＜0.01），MD與LD組的含量相比有所差別（t=4.815,P＜0.01），HD組與LD、MD組含量也有明顯差別（分別t=9.188,P＜0.01；t=5.698,P＜0.01）

10、；GCS在LD、MD、HD三組的含量也均較對(duì)照組有下降（分別為9.60±1.01g/ml，t=3.804,P＜0.01；7.75±0.76ng/ml，t=8.709,P＜0.01；6.33±0.87ng/ml，t=11.11,P＜0.01，MD與LD組的含量相比有明顯差別（t=3.608,P＜0.01），HD組與LD、MD組含量的差別也同樣具有顯著性。（分別t=6.032,P＜0.01；t=3.187,P＜0.05）。
　　 結(jié)