哮喘大鼠血清對嗜鉻細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的影響及補(bǔ)腎方的干預(yù)作用.pdf

1、目的：觀察哮喘大鼠血清對大鼠嗜鉻細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的影響，并通過補(bǔ)腎方血清對正常嗜鉻細(xì)胞的干預(yù)，初步了解“從腎論治哮喘”的可能途徑。
　　 方法：32只Sprague-Dawley(SD)大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為四組：對照組(CG)、哮喘組(ASG)、地塞米松組(DXMG)、補(bǔ)腎方組(KTSG)，除對照組外，其余三組均以O(shè)VA、滅活百日咳桿菌及氫氧化鋁致敏，之后四組均予以O(shè)VA霧化激發(fā)。14天后處死各組大鼠，取血清備用。另以SD大鼠提

2、取正常原代腎上腺嗜鉻細(xì)胞，待細(xì)胞活性穩(wěn)定后分為四組：對照血清干預(yù)組(CSG)、哮喘血清干預(yù)組(ASSG)、地塞米松血清干預(yù)組(DXMSG)、補(bǔ)腎方血清干預(yù)組(KTSG)，每組均分別以動物實驗所提取血清干預(yù)細(xì)胞72h，分別提取細(xì)胞及培養(yǎng)液上清。ELISA法檢測培養(yǎng)液上清中腎上腺素含量(EPI)；電鏡觀測各組細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)；RT-PCR檢測細(xì)胞中Rho GDIα及Peripherin mRNA表達(dá)水平；免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測RhoGDIα及Pe

3、dpherin蛋白表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：各組細(xì)胞培養(yǎng)液上清中，哮喘血清干預(yù)組腎上腺素含量明顯低于正常血清干預(yù)組(16.02±3.08 vs24.65±3.52pg/ml，P<0.05)；補(bǔ)腎方血清干預(yù)組(20.52±1.97pg/ml)及地塞米松血清干預(yù)組(20.54±2.41pg/ml)腎上腺素含量明顯高于哮喘血清干預(yù)組(P<0.05)。細(xì)胞電鏡顯示哮喘血清干預(yù)組嗜鉻細(xì)胞結(jié)構(gòu)紊亂，分泌囊泡脫落，伸出大量突觸；與之相比，補(bǔ)腎方

4、血清干預(yù)組與地塞米松血清干預(yù)組嗜鉻細(xì)胞結(jié)構(gòu)保存較完整，突觸樣細(xì)胞突起伸出不明顯，分泌囊泡形態(tài)良好。細(xì)胞RT-PCR分析顯示與對照血清干預(yù)組相比，哮喘血清干預(yù)組Rho GDIα mRNA表達(dá)明顯減弱(P<0.05)，而Peripherin mRNA表達(dá)則明顯增強(qiáng)(P<0.05)。細(xì)胞免疫化學(xué)結(jié)果同樣證實，哮喘血清干預(yù)組Rho GDIα熒光強(qiáng)度明顯弱于正常血清干預(yù)組；Peripherin熒光表達(dá)則明顯強(qiáng)于正常血清干預(yù)組。與哮喘血清干預(yù)組相比

5、，補(bǔ)腎方血清干預(yù)組及地塞米松血清干預(yù)組Rho GDIα mRNA表達(dá)明顯強(qiáng)于哮喘血清干預(yù)組(P<0.05)，Peripherin mRNA表達(dá)弱于哮喘血清干預(yù)組(P<0.05)；補(bǔ)腎血清干預(yù)組及地塞米松血清干預(yù)組Rho GDIα熒光表達(dá)均明顯高于哮喘血清干預(yù)組；Peripherin熒光表達(dá)則明顯弱于哮喘血清干預(yù)組；
　　 結(jié)論：⑴哮喘大鼠血清可對嗜鉻細(xì)胞結(jié)構(gòu)和內(nèi)分泌功能產(chǎn)生影響；⑵補(bǔ)腎方可保護(hù)腎上腺嗜鉻細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能，抑制其向