達(dá)托霉素長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體抗耐甲氧西林金葡菌的研究.pdf

1、隨著病原體耐藥防控難度的持續(xù)增大，除不斷研發(fā)新型抗生素之外，對(duì)已有抗生素進(jìn)行遞送研究與新制劑創(chuàng)制具有同等重要性。達(dá)托霉素是近年來(lái)上市的一種新型脂肽類抗生素，目前僅有其普通溶液型注射劑用于臨床。本文采用聚乙二醇修飾的脂質(zhì)體作為載體，考察并系統(tǒng)評(píng)價(jià)經(jīng)優(yōu)化制備的長(zhǎng)循環(huán)達(dá)托霉素脂質(zhì)體(PLD)抗耐甲氧西林金葡菌(MRSA252)全身感染。通過(guò)優(yōu)化制備得到的達(dá)托霉素脂質(zhì)體粒徑（111.5±15.4）nm、載藥量較高（5.81±0.19）％，并具有

2、良好穩(wěn)定性。體內(nèi)外評(píng)價(jià)結(jié)果顯示，在相同劑量下PLD與達(dá)托霉素原料藥及普通脂質(zhì)體制劑相比，對(duì)MRSA252有更持久的抑制效果，并能顯著提高耐甲氧西林金葡菌全身感染模型小鼠的存活率。此外，PLD能顯著提高達(dá)托霉素在肺部的分布并顯示良好的安全性。上述研究結(jié)果提示，長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)化達(dá)托霉素對(duì)抗MRSA嚴(yán)重感染（血源性肺炎等）具有良好的應(yīng)用前景，可為達(dá)托霉素新制劑的研發(fā)及臨床相關(guān)研究提供重要參考。
　　本課題主要研究?jī)?nèi)容如下:
　　(1)

3、達(dá)托霉素長(zhǎng)循分析方法的建立
　　確定達(dá)托霉素的最大吸收波長(zhǎng)為221nm，并且還確定了HPLC檢測(cè)達(dá)托霉素的色譜條件:
　　色譜柱:Inertsil ODS-SP C18柱（150mm×5mm，5μm）
　　流動(dòng)相:乙腈-0.5％磷酸二氫銨緩沖液=40∶60
　　流速:0.7 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):221nm
　　進(jìn)樣量:20μL;柱溫:30℃
　　出峰時(shí)間:6.5±0.2 min
　　最低檢測(cè)

4、限:0.60 ng
　　還通過(guò)回收率實(shí)驗(yàn)、精密度實(shí)驗(yàn)得出此種檢測(cè)方法準(zhǔn)確且重現(xiàn)性好。
　　(2)達(dá)托霉素長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的制備及相關(guān)性質(zhì)考察
　　通過(guò)考察制備達(dá)托霉素長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的幾個(gè)影響因素:氫化卵磷脂(HSPC)與膽固醇的摩爾比、脂藥質(zhì)量比以及高壓均質(zhì)機(jī)循環(huán)次數(shù)。最終得出制備達(dá)托霉素長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的最優(yōu)處方為，氫化卵磷脂∶膽固醇∶mPEG2000-DSPE=18∶6∶1（摩爾比），脂藥比=15∶1（質(zhì)量比），水化液經(jīng)高壓

5、均質(zhì)機(jī)1000 bars循環(huán)均質(zhì)10次，就能得到穩(wěn)定的達(dá)托霉素長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體。由最優(yōu)制備工藝所制得的脂質(zhì)體，粒徑為(111.5±15.4) nm，Zeta電位為(-15.1±2.8) mV，載藥量為(5.81±0.19)％，包封率為(92.56±3.15)％，并且性質(zhì)穩(wěn)定，在4℃的冰箱中保存2個(gè)月后幾乎無(wú)泄漏、無(wú)沉淀現(xiàn)象發(fā)生。
　　(3)體外抗耐甲氧西林金葡菌實(shí)驗(yàn)
　　主要考察達(dá)托霉素三個(gè)制劑:達(dá)托霉素原料藥水溶液DS、普通達(dá)

6、托霉素脂質(zhì)體CLD、達(dá)托霉素長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體PLD對(duì)MRSA252生長(zhǎng)的影響，結(jié)果表明，PLD對(duì)MRSA252的抑制效果更持久。
　　(4)藥動(dòng)學(xué)及組織分布研究
　　結(jié)果表面達(dá)托霉素長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體延長(zhǎng)了達(dá)托霉素在大鼠血液里的循環(huán)時(shí)間，且明顯的增加了達(dá)托霉素在肝、脾、肺的分布量。
　　(5)體內(nèi)藥效學(xué)、安全性評(píng)價(jià)
　　通過(guò)比較DS、CLD、PLD對(duì)MRSA252致全身感染KM小鼠的治療效果比較，結(jié)果顯示，尾靜脈注射單次次