辣椒堿長循環(huán)脂質(zhì)體的制備及其體內(nèi)外研究.pdf

1、目的:辣椒堿(Capsaicin，CAP)是一種香草酰胺類生物堿，是辣椒中起辛辣作用的主要活性成分。辣椒堿在很多方面都起到很好的作用，包括鎮(zhèn)痛、肥胖癥、心血管以及胃腸道疾病、各種癌癥、神經(jīng)源性膀胱炎、皮膚用藥等等。其中鎮(zhèn)痛作用是最為獨(dú)特的，其是通過影響5-羥色胺的變化以及耗竭神經(jīng)肽P物質(zhì)而起作用。這也是其與中樞鎮(zhèn)痛作用和解熱鎮(zhèn)痛作用相區(qū)別的原因。同時(shí)辣椒堿無變態(tài)反應(yīng)，無胃腸道反應(yīng)，無成癮性，具有很好的開發(fā)前景。但是由于其嚴(yán)重的肝首過效應(yīng)

2、，同時(shí)半衰期過短，目前臨床上主要采取局部給藥，但是這種給藥方式會出現(xiàn)較嚴(yán)重的副作用，比如皮膚燒灼刺痛、瘙癢潮紅、局部充血，有的甚至能引起神經(jīng)炎癥。近年來研究人員不斷研究新的劑型，試圖改善其局部給藥副作用。在這個(gè)過程中研究人員發(fā)現(xiàn)，辣椒堿在體內(nèi)半衰期過短的現(xiàn)狀依然無法改善。因此我們迫切需要找到一種新劑型，來改善其現(xiàn)狀。
　　脂質(zhì)體(Liposomes)是由磷脂和膽固醇組成，常用做藥物載體。然而由于各種原因，普通脂質(zhì)體的應(yīng)用受到了限制

3、。近年來，研究人員不斷進(jìn)行脂質(zhì)體表面修飾的研究，希望能達(dá)到緩釋藥物、延長藥物半衰期、減小刺激性、主動靶向、增加生理相容性等目的。目前常用的修飾劑包括:殼聚糖及其衍生物、聚乙二醇、半乳糖、聚乙烯醇、轉(zhuǎn)鐵蛋白、肽類等等。在這些修飾劑中，聚乙二醇的作用最為明顯。將它加載到脂質(zhì)體表面，能夠明顯延長藥物在體循環(huán)時(shí)間，延長藥物半衰期。因此，本課題將制備PEG修飾辣椒堿脂質(zhì)體(PEGylated capsaicin liposome，PEGylate

4、d-CAP-Lip)，延長辣椒堿的半衰期，為辣椒堿的進(jìn)一步開發(fā)奠定基礎(chǔ)。
　　方法:采用薄膜分散-超聲法制備PEG修飾辣椒堿脂質(zhì)體（辣椒堿長循環(huán)脂質(zhì)體），建立微柱離心法分離長循環(huán)脂質(zhì)體和游離藥物，分別考察柱床高度、離心轉(zhuǎn)速對分離效果的影響;建立RP-HPLC法測定辣椒堿長循環(huán)脂質(zhì)體包封率的方法;采用單因素實(shí)驗(yàn)逐個(gè)考察對辣椒堿長循環(huán)脂質(zhì)體包封率有影響的處方及工藝因素，篩選出對包封率影響較大的因素，然后采用星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面優(yōu)化法優(yōu)化處

5、方，確定最優(yōu)處方及制備工藝，進(jìn)行驗(yàn)證及質(zhì)量評價(jià)。
　　采用溶出度儀分別考察辣椒堿溶液、辣椒堿脂質(zhì)體(Capsaicinliposome，CAP-Lip)和辣椒堿長循環(huán)脂質(zhì)體的體外釋藥行為，建立RP-HPLC法測定體外釋放介質(zhì)中辣椒堿濃度的方法，繪制累積釋放率對時(shí)間曲線，并對結(jié)果進(jìn)行模型擬合，探討辣椒堿長循環(huán)脂質(zhì)體的釋藥機(jī)制。
　　大鼠尾靜脈單劑量注射含相同藥物量的辣椒堿脂質(zhì)體及辣椒堿長循環(huán)脂質(zhì)體，考察其藥動學(xué)行為并比較半衰期

6、。建立RP-HPLC-熒光法測定大鼠血漿藥物濃度，繪制藥時(shí)曲線，運(yùn)用Kinetica4.4.1軟件進(jìn)行相關(guān)藥動學(xué)參數(shù)計(jì)算。
　　考察辣椒堿長循環(huán)脂質(zhì)體在不同溫度及光照條件下脂質(zhì)體的泄露率，并觀察脂質(zhì)體外觀及性狀等性質(zhì)的變化?？疾炖苯穳A長循環(huán)脂質(zhì)體的長期穩(wěn)定性，為辣椒堿修飾脂質(zhì)體的儲存提供理論依據(jù)。
　　結(jié)果:確定了微柱離心法分離脂質(zhì)體和游離辣椒堿的條件。即柱高為1.1 mL，上樣量為0.2 mL，洗脫液為0.2 mL PBS

7、溶液(pH=7.4)，兩次離心轉(zhuǎn)速均為2500 rpm，離心時(shí)間均為3min，且第一次離心不加洗脫液。辣椒堿溶液、空白脂質(zhì)體和脂質(zhì)體中辣椒堿的柱回收率分別為98.07％、97.74％、100.2％，滿足測定要求。建立了RP-HPLC法測定辣椒堿長循環(huán)脂質(zhì)體包封率的方法，專屬性強(qiáng)、穩(wěn)定性好。
　　采用薄膜分散-超聲法制備辣椒堿長循環(huán)脂質(zhì)體，單因素考察對長循環(huán)脂質(zhì)體包封率有影響的處方及工藝條件，篩選出對包封率影響較大的3個(gè)條件，即藥物

8、與磷脂的質(zhì)量比（X1）、磷脂與膽固醇的摩爾比（X2）和PEG-2000與磷脂的摩爾比(X3)，采用星點(diǎn)效應(yīng)面優(yōu)化法進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)果為:X1=0.05，X2=0.25，X3=0.08;其他條件固定為水化介質(zhì)pH7.4 PBS溶液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)速度為120 rpm，溫度為50℃，水化時(shí)間為3h，超聲時(shí)間為4min，超聲功率為200W。按最優(yōu)處方制備得到辣椒堿修飾脂質(zhì)體的包封率和載藥量分別為76.45％、2.88％，平均粒徑為120.2 nm。

9、r>　　體外釋放度結(jié)果顯示，辣椒堿溶液的體外釋放速度最快，在4h釋放即達(dá)到87.17％;辣椒堿脂質(zhì)體和辣椒堿長循環(huán)脂質(zhì)體的釋放均較辣椒堿溶液緩慢，其中辣椒堿脂質(zhì)體在19h釋放達(dá)到80.09％，而辣椒堿長循環(huán)脂質(zhì)體在25 h釋放才達(dá)到76.49％，表明辣椒堿長循環(huán)脂質(zhì)體的體外釋放速度較辣椒堿脂質(zhì)體緩慢。模型擬合結(jié)果顯示辣椒堿脂質(zhì)體和辣椒堿長循環(huán)脂質(zhì)體均較符合一級釋放模型。
　　采用RP-HPLC-熒光法測定大鼠血漿中辣椒堿濃度，方法

10、專屬性強(qiáng)、穩(wěn)定性好。單劑量尾靜脈注射辣椒堿脂質(zhì)體及辣椒堿長循環(huán)脂質(zhì)體，繪制其藥時(shí)曲線，通過Kinetica4.4.1軟件分析，辣椒堿脂質(zhì)體及辣椒堿長循環(huán)脂質(zhì)體的消除半衰期分別為21.63±2.61 min，48.14±3.79 min，表明辣椒堿長循環(huán)脂質(zhì)體較辣椒堿脂質(zhì)體具有顯著緩釋作用。
　　溫度和光照對辣椒堿長循環(huán)脂質(zhì)體的儲存均有較大影響，在升高溫度或者加強(qiáng)光照條件下，脂質(zhì)體的泄露率顯著提高，外觀性狀明顯改變。長期實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明