冬凌草甲素長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的研究.pdf

1、冬凌草甲素是從冬凌草中提取分離的一種四環(huán)二萜類化合物，而冬凌草是應(yīng)用于臨床最重要的中草藥之一。半個(gè)多世紀(jì)以前，就已證實(shí)冬凌草甲素具有免疫調(diào)節(jié)、抗炎、抗病毒等作用，特別是對(duì)上呼吸道感染有很好的治療作用。最近的實(shí)驗(yàn)室和臨床研究表明，冬凌草甲素是有效的抗移植性腫瘤-前列腺癌、乳腺癌、大葉肺細(xì)胞癌等的藥物。由于冬凌草甲素易氧化、水溶性差、生物半衰期短，限制了作為臨床化療藥物的使用。論文旨在通過(guò)制備冬凌草甲素長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體，使藥物在血液中滯留時(shí)間延

2、長(zhǎng)，濃度升高。論文對(duì)冬凌草甲素長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體制備工藝，冬凌草甲素長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體在小鼠血液和組織中的分布及冬凌草甲素長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體對(duì)荷H22肝癌小鼠的抗腫瘤作用進(jìn)行了研究。 首先研究了冬凌草中冬凌草甲素的提取純化工藝。向冬凌草粉末中加入12倍量的95％乙醇，超聲提取3次，每次30min。再向冬凌草乙醇提取液中加入冬凌草用量24％的活性炭超聲脫色2次，每次20min。確定冬凌草甲素粗品的制備型高效液相色譜分離條件：色譜柱為μ Bondap

3、ackTMC18（80mm i.d×300mm，粒徑25μm～40μm）；柱溫：40℃；流動(dòng)相：甲醇-水（50/50，V/V）；流速：60mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：238nm；進(jìn)樣體積：10mL。將所收集的16min～23min的洗脫液經(jīng)蒸發(fā)濃縮，真空干燥，得冬凌草甲素白色粉末，經(jīng)高效液相檢測(cè)純度為99.0％，提取率65.4％。采用質(zhì)譜、元素分析、紫外、紅外、核磁共振和高效液相色譜鑒定和驗(yàn)證了提取物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。 研究冬凌草甲素

4、長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的制備工藝和建立測(cè)定冬凌草甲素含量的高效液相色譜法。以包封率和載藥量為指標(biāo)，考察了大豆卵磷脂、膽固醇、冬凌草甲素和聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺（PEG2000-DSPE）的用量，水化介質(zhì)的種類和體積，對(duì)包封率和載藥量的影響。通過(guò)試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化了處方及制備工藝；選用LichrospherC18柱（4.6 mm i.d×250mm，粒徑5μm），柱溫40℃，以甲醇-水（70/30，V/V）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)238nm，在

5、流速1.0mL·min-1條件下進(jìn)樣10μL測(cè)定冬凌草甲素含量。最佳工藝為大豆卵磷脂0.26g，膽固醇0.14g，冬凌草甲素0.04g，PEG2000-DSPE0.5g，純凈水30mL，制得的冬凌草甲素脂質(zhì)體粒徑在100nm～200nm之間呈正態(tài)分布，平均粒徑150nm，包封率達(dá)95.4％，載藥量為4.24％。體外釋放結(jié)果表明，脂質(zhì)體中冬凌草甲素在96h釋放基本完全。確定的處方較好，工藝可行，高效液相色譜法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、快速，有利于控制冬

6、凌草甲素脂質(zhì)體的質(zhì)量。同法制備了冬凌草甲素普通脂質(zhì)體（脂膜中不含PEG2000-DSPE）。 制備的冬凌草甲素長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體和普通脂質(zhì)體在5℃進(jìn)行貯存試驗(yàn)，80d后各項(xiàng)指標(biāo)保持穩(wěn)定，包封率基本沒(méi)有變化。結(jié)果表明，冬凌草甲素長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體和普通脂質(zhì)體在5℃條件下貯存穩(wěn)定性良好。 研究冬凌草甲素長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體和普通脂質(zhì)體在小鼠體內(nèi)的組織分布及藥代動(dòng)力學(xué)特性。采用高效液相色譜法測(cè)定小鼠血液和組織中冬凌草甲素的濃度。對(duì)冬凌草甲素長(zhǎng)循環(huán)

7、脂質(zhì)體、冬凌草甲素普通脂質(zhì)體和冬凌草甲素注射液在小鼠體內(nèi)分布特點(diǎn)和藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)進(jìn)行了比較。結(jié)果表明，冬凌草甲素長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體在肝、脾、肺、心及腎中的相對(duì)靶向率分別為2.10、1.95、1.34、2.39和0.84；冬凌草甲素普通脂質(zhì)體在肝、脾、肺、心及腎中的相對(duì)靶向率分別為4.47、3.84、1.49、1.89和0.92。靜脈注射冬凌草甲素長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體后藥時(shí)曲線表明體內(nèi)過(guò)程符合二室模型，各相半衰期分別為T1/2α=3.18h，T1/2β

8、=98.36h，血藥濃度-時(shí)間曲線下面積AUC0-48h=888.91 h·μg·mL-1，中心分布容VC=19.17 mL·Kg-1；靜脈注射冬凌草甲素普通脂質(zhì)體后藥時(shí)曲線表明體內(nèi)過(guò)程符合二室模型，各相半衰期分別為T1/2α-2.54h，T1/2β=33.98h，血藥濃度-時(shí)間曲線下面積AUC0-48h=356.69 h·μg·mL-1，中心分布容VC=20.01mL·Kg-1；靜脈注射冬凌草甲素注射液后藥時(shí)曲線表明體內(nèi)過(guò)程符合二室模

9、型，各相半衰期分別為T1/2α=0.63h，T1/2β=6.19h，血藥濃度，時(shí)間曲線下面積AUC0-48h=156.07 h·μg·mL-1，中心分布容VC-10.66mL·Kg-1。冬凌草甲素長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體延長(zhǎng)了冬凌草甲素在小鼠體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間。 采用動(dòng)物移植性腫瘤實(shí)驗(yàn)法，將H22小鼠肝癌細(xì)胞接種于昆明小鼠皮下，進(jìn)行體內(nèi)抑瘤試驗(yàn)，考察冬凌草甲素長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體、冬凌草甲素普通脂質(zhì)體和冬凌草甲素注射液給藥后對(duì)實(shí)體瘤的抑瘤率。結(jié)果表明，