LncRNAs表達水平及其基因多態(tài)性與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的關聯(lián)性研究.pdf

1、研究背景：
　　系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus, SLE)是一種慢性多系統(tǒng)性的自身免疫性疾病，其以多種自身抗體產(chǎn)生和大量免疫復合物的沉積為主要特點，并可因此導致體內(nèi)多種組織或器官的損傷。目前為止，SLE的確切發(fā)病機制尚未闡明。過去幾十年中的實驗和臨床研究表明，遺傳因素、環(huán)境因素、免疫調(diào)節(jié)因素及其之間的交互作用等共同參與了SLE的疾病進程。通過人類全基因組關聯(lián)研究（genome-wide a

2、ssociation studies,GWAS），發(fā)現(xiàn)了多個SLE的易感基因。
　　既往SLE的研究主要集中在編碼基因，而非編碼基因的報道相對較少。和那些已經(jīng)被廣泛研究的短鏈非編碼RNA（例如microRNAs）不同的是，長鏈非編碼RNA（long noncoding RNA, lncRNA)是一類長度超過200個核苷酸的非編碼RNA，且lncRNAs可能在多種生物學功能中具有調(diào)節(jié)作用。雖然lncRNAs的確切功能在很大程度上仍然

3、不清楚，但一些研究已經(jīng)表明lncRNAs可能參與了多種關鍵的生物學過程，如染色質(zhì)重塑、基因轉錄、RNA剪接和蛋白質(zhì)轉運等，這暗示它們可能對人類的多種疾病產(chǎn)生復雜的影響。
　　最近，多種lncRNAs被認為在人類的免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)中發(fā)揮著重要作用的，并且它們可能涉及一些由免疫介導的炎癥性疾病的發(fā)病機理。因此，本研究推測lncRNAs可能在SLE的發(fā)病機制中發(fā)揮了重要的作用。
　　目的：
　　檢測SLE病例和健康對照外周血單個

4、核細胞（peripheral blood mononuclear cells, PBMCs）中l(wèi)ncRNAs(GAS5, lnc-DC, linc0597 and linc0949)的表達水平，以及這些lncRNAs基因多態(tài)性與SLE易感性之間的關聯(lián)。
　　方法：
　　本研究采用兩階段的病例對照設計。在第一階段中，納入85例SLE病例和71例健康對照，用于檢測lncRNAs在PBMCs中的表達水平；當發(fā)現(xiàn)有差異表達的lncR

5、NAs后，第二階段納入860例SLE病例和831例健康對照用于檢測其單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms, SNPs)。LncRNAs的表達水平采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應（quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)，基因分型實驗通過Fluidigm EP1平臺以及TaqMan SNP探針分型方法。對4種lncRNAs表

6、達水平以及4個SNP位點的統(tǒng)計分析進行Bonferroni多重校正，檢驗水準α=0.0125（0.05/4），其余統(tǒng)計分析檢驗水準α=0.05。
　　結果：
　?。?）Linc0597，lnc-DC和 GAS5在SLE病例PBMCs中的表達水平均低于健康對照中的水平，差異均有統(tǒng)計學意義（Z=－5.984, P<0.001;Z=－3.703, P<0.001;Z=－2.995, P=0.003）；linc0949的表達水平在S

7、LE和健康對照中差異無統(tǒng)計學意義（Z=－0.254, P=0.799）。
　　（2）Linc0597在SLE合并狼瘡腎炎（lupus nephritis，LN）組的表達水平要低于非LN組，差異有統(tǒng)計學意義（Z=－2.411, P=0.016）且linc0597在SLE合并蛋白尿陽性病例中的表達水平低于蛋白尿陰性病例中的表達水平，差異有統(tǒng)計學意義（Z=－2.865, P=0.004）。Linc0949，lnc-DC和GAS5的表達水

8、平在SLE合并LN組與非LN組中差異均無統(tǒng)計學意義（均有P>0.05）。
　?。?）Linc0597的表達水平與SLE疾病活動度評分（systemic lupus erythematosus disease activity index2000，SLEDAI-2K）成負相關（rs=－0.267，P=0.013）；Linc0949，lnc-DC和GAS5的表達水平未發(fā)現(xiàn)與SLEDAI-2K評分存在相關性（均有P>0.05）。

9、　?。?）四個SNP位點與SLE的易感性被納入分析：lnc-DC的rs10515177位點;linc0597（BZRAP1-AS1)的rs2070107, rs2632516和 rs2877877位點。結果顯示，linc0597的rs2070107位點基因型CC與GG在SLE病例和健康對照中的分布頻率存在不同，差異有統(tǒng)計學意義（?2=7.164，P=0.007）。調(diào)整性別、年齡后差異無統(tǒng)計學意義（?2=5.000，P=0.025）；遺傳

10、模型分析顯示，SLE病例和健康對照在隱形模型（CC vs CG+GG）中差異有統(tǒng)計學意義（?2=7.244，P=0.007），調(diào)整性別、年齡后差異無統(tǒng)計學意義（?2=5.220，P=0.022）。其余l(xiāng)ncRNA的SNPs位點（rs10515177, rs2632516, rs2877877）基因多態(tài)性均未發(fā)現(xiàn)與 SLE易感性存在關聯(lián)（均有P>0.0125）。
　　（5）在34個SLE病例中的研究發(fā)現(xiàn)，rs2070107位點基因多

11、態(tài)性（CC+CG vs GG）與linc0597在PBMCs中的表達水平有關，差異有統(tǒng)計學意義（Z=－2.236，P=0.025）。
　　結論：
　　Linc0597，lnc-DC，GAS5在SLE病例中的表達水平較健康對照中的明顯下調(diào)，但linc0949在SLE病例和健康對照中的表達水平無明顯差異。進一步分析發(fā)現(xiàn)，SLE合并LN病例中的linc0597表達水平要低于非LN病例中的，且linc0597的表達水平可能與SLE疾