LAPTM5基因多態(tài)性與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的相關(guān)性研究.pdf

1、目的
　　系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SystemicLupusErythematosus，SLE)是一種全身多系統(tǒng)受累的慢性進行性、反復發(fā)作的自身免疫性疾病。SLE屬于多基因復合性疾病[1]，臨床表型具有相當大的異質(zhì)性，可累及皮膚、粘膜、腎、肺、心臟、關(guān)節(jié)、血液系統(tǒng)等。其病因和發(fā)病機制尚未明確，大量研究表明，SLE的發(fā)生發(fā)展與遺傳因素、性激素、感染、環(huán)境誘發(fā)因素以及機體免疫功能絮亂等因素有關(guān)。目前一般認為SLE發(fā)病時激素和環(huán)境因素觸發(fā)了具有

2、遺傳易感性的個體發(fā)生免疫學異常，尤其是體液免疫密切相關(guān)，主要涉及T淋巴細胞、B淋巴細胞、自然殺傷細胞、單核細胞等幾乎所有的單個核細胞和多細胞因子網(wǎng)絡(luò)[2]。近年來，在髓系和淋巴系特異性表達的溶酶體相關(guān)跨膜蛋白5（LAPTM5）作為LAPTM家族的一員受到國內(nèi)外學者關(guān)注[3]。LAPTM5是TCR和BCR的調(diào)節(jié)器[4，5]，其介導受體的降解與某些自身免疫性疾病相關(guān)[6,7]。我們的前期研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在高度表達的LAPTM5的MRL/Ipr

3、小鼠中形成狼瘡樣腎炎。(LupusNephritis，LN)樣改變。位于染色體1p34，在骨髓系和淋巴系特異性表達LAPTM5蛋白的基因單核苷酸多態(tài)性（SingleNucleotidePolymorphism，SNP）與SLE發(fā)病可能有一定的相關(guān)性。
　　為進一步研究LAPTM5基因多態(tài)性與SLE之間的關(guān)系，我們以中國漢族人群為研究對象，我們利用數(shù)據(jù)庫HapMap(http://hapmap.ncbi.nlm.nih.gov)和軟

4、件Haploview4.2對其（包含5'上游-4000bp）進行多態(tài)分析，篩選出在中國漢族人群(CHB)中次要等位基因頻率(Minorallelefrequency,MAF)大于0.1的其中1個標簽位點(TagSNP)。應(yīng)用聚合酶連反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性分析(PCR-RFLP)方法比較LAPTM5基因SNP在SLE病例組和健康對照組的分布，探討LAPTM5基因與SLE發(fā)病的相關(guān)性。
　　材料和方法
　　一、實驗材料

5、>　?。ㄒ唬┭芯繉ο?br>　　分析來自于1999-2004年中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院SLE并患狼瘡腎炎的住院患者與中國醫(yī)科大學體檢中心健康人群血樣，病例組SLE患者281例，男25例，女256例，其診斷根據(jù)1982年美國風濕病學會(ACR)修訂的SLE分類標準;對照組健康患者360例，其中男35例，女325例。2組的年齡、性別比例差異無統(tǒng)計學差異、并且全部研究對象無血緣關(guān)系。
　?。ǘ┲饕噭?br>　　紅細胞裂解液、DNA裂

6、解液、TE緩沖液、乙醇，75％乙醇、TENZOL液(Takara)LAPTM5引物（上海生工）、TBE緩沖液、PCR試劑盒（上海生工）、測序試劑盒(ABI公司)、6×LoadingBuffer,核酸染料，10×NEBUffer2，XcmI、水浴箱，PCR擴增儀(AppliedBiosystemsGeneAmpPCR9700)，石蠟、深低溫冰箱、凝膠紫外燈、DNA回收試劑盒等。
　　二、試驗方法
　　采用聚合酶連反應(yīng)-限制性片

7、段長度多態(tài)性分析(PCR-RFLP)方法分析中國漢族人群LAPTM5基因單核苷酸多態(tài)性，通過計算LAPTM5基因的基因型和等位基因頻率在SLE病例組和健康對照組中的分布，進而研究LAPTM5基因與SLE相關(guān)性。
　　三、測序方法
　　應(yīng)用Run3130軟件設(shè)定的程序進行自動化電泳，序列分析軟件V5.1進行序列分析，設(shè)定雜合峰高大于25％的為雜合序列。通過Blast與基因數(shù)據(jù)庫標準序列進行比對，獲得基因多態(tài)性信息。
　　

8、四、統(tǒng)計學分析
　　采用卡方檢驗，并運用SPSS軟件對SLE病例組和健康對照組基因型頻率進行統(tǒng)計學分析，判斷LAPTM5基因多態(tài)性與SLE易感性有無關(guān)聯(lián)。P＜0.05有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果
　　在LAPTM5基因A(rs1188348)G位點為1個有義SNP位點，該位點存在3中基因型，即A/G型、G/G型、A/A型。各型在SLE病例組和健康對照組中的分布差異無統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論
　　LAPTM5基因S