MicroRNAs對秀麗線蟲固有免疫的系統(tǒng)調(diào)控研究.pdf

1、近年來，越來越多的證據(jù)顯示microRNAs(miRNAs)在固有免疫調(diào)控方面扮演了重要角色。下調(diào)的miRNA分子和多種疾病有關(guān)，如:癌癥，炎癥反應(yīng)和免疫失調(diào)。靶基因預(yù)測分析顯示了至少一半以上固有免疫基因受到miRNAs的直接調(diào)控，但是miRNA調(diào)控固有免疫的分子機制還具有其探討性。本研究利用模式動物秀麗線蟲為研究對象，在81種miRNA突變體的基礎(chǔ)上，通過在感染綠膿桿菌Pseudomonasaeruginosa(PA14)這種常見致病

2、菌后的免疫情況來篩選出與秀麗線蟲固有免疫相關(guān)的microRNA。
　　將同步化后到達L4時期的秀麗線蟲轉(zhuǎn)移到含有綠膿桿菌(PA14)的瓊脂培養(yǎng)基上，于25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)進行實驗。利用一些指標如壽命長短，秀麗線蟲體內(nèi)抗菌肽變化情況等來初篩對秀麗線蟲固有免疫有影響的microRNA，再利用雙突變等試驗方法來研究篩選出的miRNA與已知固有免疫信號通路的關(guān)系來進行探討。
　　研究結(jié)果顯示:從已有的的81種microRNA突變體秀麗

3、線蟲中初篩出了24種表現(xiàn)出抗性的miRNA突變體秀麗線蟲和11種表現(xiàn)出敏感的miRNA突變體秀麗線蟲，表明這35種miRNA可能與秀麗線蟲固有免疫相關(guān)。接下來發(fā)現(xiàn)這35種miRNA突變體秀麗線蟲中有7種參與調(diào)控秀麗線蟲的壽命。RT-PCR顯示初篩后表現(xiàn)出抗性的miRNA突變體秀麗線蟲let-7(n2853)，mir-45(n4280)，mir-60(n4974)，mir-79(n4126)，mir-84(n4037)，mir-355(n

4、4618)在感染綠膿桿菌后體內(nèi)抗菌肽顯著上調(diào)表達。RT-PCR也顯示初篩后從表現(xiàn)出敏感的miRNA突變體秀麗線蟲mir-70(n4109)，mir-73&74(ndf47)，mir-85(n4117)，mir-233(n4761)，mir-360(n4635)在感染綠膿桿菌后體內(nèi)抗菌肽顯著下調(diào)表達。同時RT-PCR分析了突變體秀麗線蟲let-7(n2853),mir-60(n4974),mir-79(n4126),mir-84(n403

5、7),mir-355(n4618), mir-73&74(ndf47)，mir-233(n4761)與已知免疫信號通路之中主要基因，發(fā)現(xiàn)這些miRNAs在一定程度上參與調(diào)控了這些免疫基因，推測這些miRNAs也參與調(diào)控了已知的固有免疫信號通路。接下來突變體秀麗線蟲mir-60(n4974)和mir-233(n4761)與p38 MAPK免疫信號通路、Toll樣免疫信號通路(Toll-like)、TGF-β免疫信號通路、胰島素免疫信號通路

6、(Insulin signaling)這四種免疫信號通路中的關(guān)鍵基因pmk-1、tol-1、dbl-1、daf-16進行雙突變實驗，實驗結(jié)果表明突變體秀麗線蟲由于缺乏mir-60在綠膿桿菌侵染時表現(xiàn)出的抗性表型被恢復(fù)到野生型水平;而突變體秀麗由于缺乏mir-233在綠膿桿菌侵染時表現(xiàn)出的敏感表型被放大。
　　總之，本實驗證明了microRNA分子確實參與了秀麗線蟲固有免疫調(diào)控，鑒定了可能參與固有免疫的可能miRNA遺傳位點，且這些