人同源盒基因HOXB4慢病毒載體的構(gòu)建和鑒定及其在臍帶間充質(zhì)干細胞中的表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:本實驗旨在構(gòu)建人同源盒基因(HomeoboxGene)HOXB4的慢病毒載體,探討慢病毒介導的HOXB4感染人臍帶間充質(zhì)干細胞后的變化。
　　 方法:利用PCR擴增獲得HOXB4,并克隆入慢病毒穿梭載體Lend-shuttle。運用四質(zhì)粒慢病毒包裝系統(tǒng)轉(zhuǎn)染HEK293T細胞,48h收獲侵病毒Lend-HOXB4,并測定慢病毒滴度。將Lend-HOXB4感染人臍帶間充質(zhì)干細胞,倒置熒光顯微鏡觀察細胞感染效果,確定最佳的病毒感

2、染復數(shù)(MOI)。同時,利用RT-PCR、免疫熒光染色、流式細胞術檢測HOXB4的表達情況,CCK-8檢測HOXB4對細胞生長的影響。
　　 結(jié)果:利用四質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T,成功獲得Lenti-HOXB4,測定的病毒滴度為3×10。TU/ml;當MOI為20時,Lend-HOXB4對人臍帶間充質(zhì)干細胞具有較高的轉(zhuǎn)染效率,達80%以上。感染Lend-HOXB4的人臍帶間充質(zhì)干細胞,在mRNA、蛋白水平上均檢測到了目的基因的表達,其

3、能促進臍帶間充質(zhì)干細胞增殖一倍,流式結(jié)果表:CD340.79%CD451.48%CD10592.68%CD4497.41%與轉(zhuǎn)染前比較CD340.13%CD450.14%.CD10599.95%CD9099.88%,造血細胞表面標志略有增高,間充質(zhì)干細胞的表面標志無明顯改變。
　　 結(jié)論:1.成功構(gòu)建了HOXB4慢病毒載體并獲得了HUCMSCs-HOXB4基因工程細胞。2.HOXB4基因能促進臍帶間充質(zhì)干細胞的增殖.3-HOXB

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