攜帶白介素-18基因的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的構(gòu)建及其意義.pdf

1、目的中文摘要構(gòu)建攜帶白介素一18(IL一18)基因的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(hUMSCs)，為腫瘤的靶向性基因治療研究提供一種手段。方法體外分離培養(yǎng)hUMSCs，流式細(xì)胞儀(FACS)檢測(cè)hUMSCs的細(xì)胞免疫表型CD29、CD44、CDl05、CD34和CD45。應(yīng)用基因重組技術(shù)將表達(dá)IL一18基因的慢病毒和空白慢病毒轉(zhuǎn)染至hUMSCs。實(shí)驗(yàn)共設(shè)3個(gè)組：實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)染慢病毒(IL一18一hUMSCs)，對(duì)照組轉(zhuǎn)染空白慢病毒(NC—hUMSCs

2、)，空白對(duì)照組未進(jìn)行轉(zhuǎn)染(hUMSCs)。利用RT—PCR及Western法檢測(cè)各組兒一18的mRNA及蛋白表達(dá)水平。結(jié)果成功在體外分離和培養(yǎng)了hUMSCs，流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示hUMSCs表達(dá)CD29、CD44和CDl05，而不表達(dá)CD34和CD45，符合hUMSCs的表型。成功構(gòu)建了攜帶工L一18基因的hUMSCs，RTPCR及Western法檢測(cè)結(jié)果提示實(shí)驗(yàn)組IL一18的mRNA及蛋白相對(duì)表達(dá)量明顯高于其他組(P均005)，成功

3、將IL一18基因轉(zhuǎn)染至hUMSCs并能穩(wěn)定表達(dá)。結(jié)論成功構(gòu)建了攜帶IL18基因的hUMSCs并能穩(wěn)定表達(dá)IL—18，為腫瘤靶向性基因治療實(shí)驗(yàn)性研究提供了一種新實(shí)驗(yàn)手段。碩士研究生王琳(普外科)指導(dǎo)教師李福年教授關(guān)鍵詞：白介素一18；人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞；基因治療；目錄弓I言。”1第一章材料與方法“211藥品和試劑212儀器設(shè)備213實(shí)驗(yàn)方法3131hUMSCs的體外分離培養(yǎng)和形態(tài)學(xué)觀察一3132hUMSCs表面標(biāo)志的檢測(cè)4133攜帶IL1

4、8基因的慢病毒轉(zhuǎn)染hUMSCs一5134RT—PCR法檢測(cè)IL18hUMSCs的mRNA表達(dá)情況一6135Western法檢測(cè)IL18hUMSCs的蛋白表達(dá)情況”7136統(tǒng)計(jì)學(xué)分析10第二章結(jié)果”1121hUMSCs分離培養(yǎng)和鑒定1122轉(zhuǎn)染IL一18的hUMSCs的鑒定結(jié)果1123IL一18mRNA的表達(dá)結(jié)果1224IL一18蛋白表達(dá)情況13第三章討論l5第四章結(jié)論17參考文獻(xiàn)”17綜麥苤19綜述的參考文獻(xiàn)24攻讀學(xué)位期間的研究成果“