結(jié)腸癌細胞中腺病毒介導(dǎo)的Bcl-XL shRNA增強TRAIL誘導(dǎo)細胞凋亡.pdf

1、【背景和目的】:腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(tumor necrosis factor-relatedapoptosis-inducing ligand,TRAIL)是腫瘤壞死因子(TNF)基因超家族的成員之一,它能通過死亡受體(death receptor,DR)途徑引起細胞凋亡。之前有報道,TRAIL能夠選擇性地引起多種腫瘤細胞發(fā)生凋亡,但對多數(shù)正常細胞沒有明顯毒性作用,這提示TRAIL在腫瘤治療中具有潛在的應(yīng)用價值。目前,重組型

2、TRAIL蛋白和TRAIL受體單抗正在進行臨床試驗中,它們具有良好的抗腫瘤效果和溫和的毒副作用,這一結(jié)果令人振奮。然而,很多腫瘤細胞對TRAIL具有耐受性,這就需要我們聯(lián)合其它治療方法增強腫瘤細胞對TRAIL的敏感性。我們之前報道Bcl-XL siRNA能夠增強TRAIL誘導(dǎo)的細胞凋亡作用。但是在體內(nèi)傳遞化學(xué)合成的siRNA仍然是RNA干擾治療手段發(fā)展的重要障礙。為此我們構(gòu)建了在U6啟動子驅(qū)動下能夠表達Bcl-XL靶向的小發(fā)夾RNA(B

3、cl-XL shRNA)的腺病毒Ad/Bcl-XL shRNA。在本項研究中我們的主要目標是檢測聯(lián)合用藥時,Ad/Bcl-XL shRNA能否增強Ad/gTRAIL在結(jié)腸癌細胞包括TRAIL耐藥細胞中誘導(dǎo)的凋亡。
　　【材料和方法】:用293細胞擴增實驗中的各種重組腺病毒(Ad/CMV-GFP,Ad/gTRAIL,Ad/Bcl-XL shRNA),通過氯化銫密度梯度離心法純化腺病毒,OD260和TCID50的方法分別測定病毒液濃度

4、和滴度;用Ad/gTRAIL反復(fù)處理DLD1細胞篩選得到TRAIL耐受的DLD1-R細胞;用MTT方法測定細胞相對活性;用Westernblot的方法測定凋亡相關(guān)蛋白的表達情況;實驗中PBS組作為空白對照,Ad/CMV-GFP作為載體對照:用方差分析的方法比較各組的差異。
　　【結(jié)果】:聯(lián)合使用Ad/gTRAIL和Ad/Bcl-XL shRNA能明顯抑制TRAIL敏感的結(jié)腸癌細胞系DLD1和Lovo的生長,與單藥相比聯(lián)合用藥顯著增

5、強腫瘤細胞凋亡,具有協(xié)同作用;用Ad/gTRAIL反復(fù)處理DLD1會導(dǎo)致獲得性TRAIL耐藥,得到TRAIL耐藥的DLD1-R細胞,在該細胞中Bcl-XL表達明顯增高;進一步研究提示聯(lián)合Ad/gTRAIL和Ad/Bcl-XL shRNA可以逆轉(zhuǎn)DLD1-R的TRAIL獲得性耐藥,增強TRAIL對caspase-8、caspase-9、caspase-3、PARP及BID的激活作用;聯(lián)合治療還明顯增強了細胞色素c的釋放。
　　【結(jié)論