白藜蘆醇對(duì)甲醛誘導(dǎo)PC12細(xì)胞氧化損傷的影響.pdf

1、目的：觀察甲醛對(duì)體外培養(yǎng)的鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤單克隆細(xì)胞系(PC12細(xì)胞)的影響，探討甲醛損傷PC12細(xì)胞的作用機(jī)制；觀察白藜蘆醇(Resveratrol,Res)預(yù)處理對(duì)甲醛所致PC12細(xì)胞損傷的影響，研究其可能的作用機(jī)制。
　　方法：
　　1.甲醛對(duì)體外培養(yǎng)鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤單克隆細(xì)胞系(PC12細(xì)胞)的損傷及其機(jī)制研究：體外常規(guī)培養(yǎng)PC12細(xì)胞，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)設(shè)空白對(duì)照組和甲醛損傷組(終濃度為10μmo

2、l/L，20μmol/L，40μmol/L，80μmol/L，160μmol/L)加藥后培養(yǎng)24h。采用四甲基偶氮噻唑藍(lán)比色法檢測(cè)細(xì)胞活力，分光光度法測(cè)定LDH漏出量，硫代巴比妥酸法測(cè)定MDA含量，黃嘌呤氧化酶法測(cè)定SOD活性，二硫?qū)Χ趸郊姿?DTNB)比色法測(cè)定GSH-Px活性，硝酸還原酶法檢測(cè)NO濃度及一氧化氮合酶(iNOS)活性的變化，以觀察甲醛對(duì)細(xì)胞氧化/抗氧化系統(tǒng)的影響；收集各組細(xì)胞，檢測(cè)細(xì)胞色素C氧化酶亞基Ⅱ(COⅡ)蛋

3、白活性及細(xì)胞色素C氧化酶亞基Ⅱ(COⅡ)mRNA的表達(dá)，并采用Hoechst33258熒光染色法和流式細(xì)胞技術(shù)檢查細(xì)胞凋亡情況，以闡明甲醛對(duì)PC12細(xì)胞線粒體的損傷機(jī)制。
　　2.白藜蘆醇對(duì)甲醛致PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)及其機(jī)制研究：設(shè)正常細(xì)胞組、溶媒組(2‰DMSO)、甲醛損傷組(80μmol/L)、白藜蘆醇組(6.25μmol/L，12.5μmol/L，25μmol/L，50μmol/L，100μmol/L)、氨基胍組(100μ

4、mol/L)。其中白藜蘆醇與細(xì)胞預(yù)孵2h后加入甲醛(終濃度80μmol/L)置孵箱培養(yǎng)24h，檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH、MDA、NO含量以及SOD、GSH-Px、iNOS活性，并收集各組細(xì)胞，檢測(cè)細(xì)胞色素C氧化酶亞基Ⅱ(COⅡ)蛋白活性及細(xì)胞色素C氧化酶亞基Ⅱ(COⅡ)mRNA的表達(dá)；Hoechst33258熒光染色法及流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡；觀察白藜蘆醇對(duì)甲醛誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷的可能保護(hù)機(jī)制。SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，Sigm

5、aPlot10.0作圖。
　　結(jié)果：
　　1.甲醛可造成PC12細(xì)胞損傷，導(dǎo)致細(xì)胞膜破裂，LDH釋放增多；
　　2.甲醛可致MDA增加，SOD、GSH-Px減少，與空白對(duì)照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；
　　3.甲醛組NO含量及NOS、iNOS活性明顯高于空白對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；
　　4.甲醛組細(xì)胞色素C氧化酶亞基Ⅱ(COⅡ)蛋白活性低于空白對(duì)照組且mRNA的表達(dá)較空白對(duì)

6、照組明顯減弱；
　　5.白藜蘆醇組LDH、MDA、NO含量及NOS、iNOS活性低于甲醛組(80μmol/L)，而SOD、GSH-Px活性高于甲醛組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；并呈劑量-效應(yīng)關(guān)系；細(xì)胞色素C氧化酶亞基Ⅱ(COⅡ)蛋白活性及mRNA表達(dá)與甲醛組相比明顯增高。Hoechst33258熒光染色法及流式細(xì)胞技術(shù)顯示白藜蘆醇能有效地改善甲醛所致PC12細(xì)胞的氧化損傷，降低凋亡率。
　　結(jié)論：
　　1、白

7、藜蘆醇對(duì)甲醛誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞氧化損傷具有保護(hù)作用，在6.25~100μmol/L濃度范圍內(nèi)其保護(hù)效應(yīng)呈劑量-效應(yīng)關(guān)系；
　　2、甲醛通過(guò)ROS/氧化應(yīng)激、NOS/NO/自由基途徑誘導(dǎo)線粒體損傷，使COⅡ結(jié)構(gòu)改變致線粒體內(nèi)細(xì)胞色素C的釋放，引起線粒體內(nèi)活性氧增多，導(dǎo)致PC12細(xì)胞凋亡。
　　3、白藜蘆醇通過(guò)抑制ROS/氧化應(yīng)激、NOS/NO/自由基途徑，激活COⅡ表達(dá)，降低PC12細(xì)胞色素C的釋放量，減輕對(duì)線粒體的損傷，降低