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文檔簡介
1、氧化應(yīng)激能夠?qū)е麦w內(nèi)多種細胞及蛋白質(zhì)過氧化，并對帕金森病、阿爾茨海默病以及缺血性腦病等神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生發(fā)展有著重要作用。Sulfiredoxin-1(Srxn1)為一種內(nèi)源性抗氧化蛋白，具有神經(jīng)保護作用。然而，Srxn1在氧化應(yīng)激中的作用機制還未被深入研究。
目的:探討Srxn1對雙氧水誘導(dǎo)的PC12細胞氧化應(yīng)激損傷的抗氧化保護作用及其潛在機制。
方法:(1)用不同濃度(60uM，100uM，140uM，1
2、80uM，200uM，240uM)的H2O2作用于PC12細胞24h，通過MTT和LDH測定從中篩選出最適H2O2濃度。再用該濃度作用于PC12細胞不同時間(3h，6h，12h，24h，48h)，通過MTT和LDH測定從中篩選出最適H2O2時間。(2)構(gòu)建三條Srxn1干擾質(zhì)粒載體(PLVT574，PLVT575，PLVT576)及一條陰性載體(PLVT4)，通過脂質(zhì)體(Lipofectamine2000)瞬時轉(zhuǎn)染給PC12細胞，在倒置
3、顯微鏡和熒光顯微鏡下觀察細胞形態(tài)及轉(zhuǎn)染效率，用RT-PCR和Western Blot測定干擾效率。(3)用MTT及LDH試劑盒測定細胞活性及細胞損傷程度，用超氧化物歧化酶(SOD)、微量還原型谷胱甘肽測定試劑盒分析細胞內(nèi)氧化應(yīng)激狀態(tài)。RT-PCR和Western國家自然科學(xué)基金資助(No.81070917和81271460) Blot進一步測定Srxn1的表達與2-Cys Prdxs活性之間的關(guān)系。
結(jié)果:(1) MTT和
4、LDH測定顯示，180uM H2O2作用于PC12細胞24h為最適氧化應(yīng)激模型。(2) RT-PCR和Western Blot分析顯示，與對照組相比，PLVT574、PLVT576和PLVT4的干擾效率不明顯，PLVT575的干擾效率顯著(P＜0.01)。(3) MTT和LDH結(jié)果顯示，干擾Srxn1能夠?qū)е录毎钚缘慕档图凹毎麚p傷程度的增加。超氧化物歧化酶(SOD)和微量還原型谷胱甘肽測定試劑盒分析顯示，SOD和GSH在干擾Srxn1
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