干擾小分子蛋白Sulfiredoxin-1對大鼠星形膠質細胞氧化應激損傷影響的初步研究.pdf

1、背景：
　　腦卒中等腦缺血性腦血管疾病發(fā)病率、致殘率與死亡率一直居高不下，給社會及家庭造成嚴重的負擔。腦缺血再灌注損傷使機體產生氧化應激，造成機體活性氧的釋放，使機體的內源性抗氧化防御系統(tǒng)清除能力的平衡失調。星形膠質細胞的損傷在腦缺血疾病中起著至關重要的作用。小分子蛋白Sulfiredoxin-1(Srxn1),屬于內源性保守的Sulfiredoxin抗氧化家族的成員，具有重要的神經保護作用，可能與抗氧化、抗凋亡以及抗炎癥等作用有

2、關。
　　本課題擬采用慢病毒載體干擾Srxn1基因表達，在體外以OGD誘導大鼠星形膠質細胞氧化應激損傷來模擬腦缺血再灌注，初步探討干擾Sulfiredoxin-1對OGD誘導的星形膠質細胞氧化應激損傷的影響。
　　目的：
　　初步探討干擾Sulfiredoxin-1對OGD誘導的星形膠質細胞氧化應激損傷的影響。
　　方法：
　　（1）篩選氧糖剝奪（OGD）最佳時間，用不同時間的OGD（0h，2h，4h，6h

3、，8h），復氧24h，作用于星形膠質細胞，運用MTS和LDH檢測篩選出最佳OGD作用時間。
　?。?）構建三條小發(fā)夾Srxn1干擾慢病毒載體（shRNA-Srxn1–LV3298，shRNA-Srxn1–LV3385，shRNA-Srxn1–LV3456）及一條陰性載體（LV3NC），運用慢病毒感染技術將各個載體瞬時轉染至星形膠質細胞中，倒置熒光顯微鏡下觀察細胞轉染效率，運用Westernblot和QPCR檢測干擾效率，篩選出最佳

4、干擾載體。
　?。?）運用篩選出的最佳OGD時間作用于轉染后的細胞以模擬氧化應激損傷模型。運用MTS和LDH測定細胞的活性和損傷程度。
　?。?）建立完整的Srxn1干擾的星形膠質細胞損傷模型，并運用Westernblot檢測Srxn1的蛋白水平，QPCR檢測Srxn1的mRNA水平。
　　結果：
　　（1）MTS和LDH顯示，OGD6h/復氧24h為最佳的氧化應激模型。
　　（2）倒置熒光顯微鏡觀察結果顯

5、示，慢病毒瞬時感染大鼠星形膠質細胞效果顯著，其轉染效率可達到85％以上。
　?。?）Westernblot和QPCR檢測結果顯示，與陰性對照組相比較，shRNA-Srxn1–LV3298及shRNA-Srxn1–LV3385的干擾效率不明顯，shRNA-Srxn1–LV3456的干擾效率顯著（p<0.01）。
　?。?）MTS和LDH檢測結果顯示，干擾Srxn1后能導致細胞活性明顯下降，細胞損傷顯著加重（p<0.05，p<0