GSH改善冷凍對精子氧化應(yīng)激損傷的初步研究.pdf

1、背景與目的:
　　 近年來,隨著社會經(jīng)濟的發(fā)展,人們面對著逐漸加劇的精神壓力和及環(huán)境污染等一系列社會問題,男性不育癥的發(fā)病率正成逐年上升的態(tài)勢,而對精子進(jìn)行有效的冷凍可作為一種保存男性生育力的積極手段。輔助生殖技術(shù)近年來已有了長足進(jìn)步,但對于不孕不育患者雙方,其成功率卻遠(yuǎn)無法達(dá)到他們所期盼。男性精子的質(zhì)量直接影響著臨床結(jié)局,這其中包含兩方面的意義,一是精子的數(shù)量和活力；二是精子中所含遺傳物質(zhì)的完整性。前者的檢測多見于精液常規(guī)檢查

2、、精子形態(tài)學(xué)分析檢查等,僅能體現(xiàn)精液的一般“質(zhì)量”,而無法直接體現(xiàn)精子所含遺傳物質(zhì)的完整性。近年來,氧化應(yīng)激理論成為男性學(xué)研究中的一個熱門話題。少量、持續(xù)的活性氧((Reactive Oxygen Species,ROS)有利于維持細(xì)胞的正常功能,當(dāng)ROS過量時可可引起氧化應(yīng)激損傷((Oxidative Stress,OS),損害機體的氧化防御系統(tǒng)。精子膜含有大量的多聚脂肪酸,而細(xì)胞質(zhì)中的氧化物清除酶含量較低,決定了其更易于受到ROS誘

3、導(dǎo)的損傷。精液中的ROS主要來自于白細(xì)胞和未成熟的精子,在行輔助生殖技術(shù)時,例如離心、冷凍-復(fù)蘇過程,可產(chǎn)生大量的活性氧對精子造成損傷,而使用受損后的精子行助孕,不僅會降低臨床結(jié)局,甚至可對后代產(chǎn)生嚴(yán)重影響,故對精子損傷進(jìn)行有效的檢查,可早期篩選對后代致畸的風(fēng)險,這對于臨床尤為重要。
　　 谷胱甘肽(GSH)是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸以肽鍵形式縮合而成的一種化合物,廣泛存在于有機體中。它可以運輸氨基酸通過細(xì)胞膜,且GSH的-S

4、H基可保護(hù)細(xì)胞膜上的高度不飽和脂肪酸免遭氧化,在細(xì)胞的脂質(zhì)過氧化損傷中發(fā)揮著重要的作用[1]。它既可以作為谷胱甘肽過氧化物酶的底物,清除細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)氧化物及過氧化氫,又可以單獨與自由基結(jié)合發(fā)揮自由基清除劑的作用。輔助生殖技術(shù)中常用的冷凍保護(hù)劑分為滲透性(甘油、乙二醇、二甲亞砜)和非滲透性(氨基乙酸、蔗糖、乳糖)等,甘油仍然是人類精液冷凍保存首選的保護(hù)劑。一般分為單一甘油型、甘油復(fù)合型。甘油復(fù)合型冷凍保護(hù)液是以甘油為基礎(chǔ),加入蛋黃或白蛋白或

5、蔗糖等高分子物質(zhì),以及兩性離子緩沖系統(tǒng),這是目前應(yīng)用最為廣泛和成熟的冷凍保護(hù)液。然而,受高水平活性氧刺激的不育患者,精液冷凍復(fù)蘇效率往往不能令人十分滿意。本課題擬通過在冷凍復(fù)蘇過程中添加少量的GSH,研究其在保護(hù)精子抗冷凍-解凍過程中氧化應(yīng)激損傷的影響,及其臨床結(jié)局
　　 材料與方法::
　　 1.選擇2011年2月至2011年5月在鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院生殖中心就診或擬行助孕的男性患者精液標(biāo)本,共計60份；
　　

6、 2.以血細(xì)胞計數(shù)板對每份精液標(biāo)本行常規(guī)檢查,包括:活力(a級+b級)、活動率及總密度；
　　 3.蘇木精-伊紅染色法行精子形態(tài)學(xué)分析,記錄正常形態(tài)精子比率;
　　 4.利用流式細(xì)胞儀測定TUNEL細(xì)胞陽性比率作為反映精子DNA完整性的指標(biāo);
　　 5.采用硫代巴比妥酸(TBA)比色法,測定MDA(丙二醛)的含量,作為精子膜脂類過氧化反應(yīng)程度的指標(biāo)；
　　 6.追蹤此60位患者在我中心行輔助生殖助孕的臨床

7、結(jié)局,包括女方取卵數(shù)、受精率、卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率；
　　 結(jié)果:
　　 1.冷凍可對精子造成一定的損傷,尤其是對重度少弱精組患者損傷較為明顯；加入GSH后復(fù)蘇,對輕度少弱精癥患者精液的抗氧化應(yīng)激損傷能力改善較為明顯;
　　 2.冷凍復(fù)蘇對大量吸煙患者精子的損傷明顯大于少量吸煙或不吸煙患者的精子,差異具有顯著性；但加入GSH后對其改善作用并不明顯；
　　 3.加入GSH后復(fù)蘇對既往曾有前列腺炎史患者精液抗氧

8、化應(yīng)激損傷的能力改善較大；
　　 4.在行IVF或ICSI助孕中,二者臨床結(jié)局無明顯差異性,其TUNEL細(xì)胞陽性率和MDA含量亦無明顯差異；
　　 5.當(dāng)TUNEL細(xì)胞陽性率超過65％時,可大大影響臨床結(jié)局。
　　 結(jié)論::
　　 1.體內(nèi)長期存在高水平活性氧刺激的不育患者,體外添加GSH并不能很好的改善精子抗氧化應(yīng)激損傷的能力；
　　 2.已存在有長期受活性氧刺激的不育患者,進(jìn)入周期前,先行治療