小膠質(zhì)細(xì)胞乳鐵蛋白的表達(dá)及其對(duì)腹側(cè)中腦神經(jīng)元的作用研究.pdf

1、小膠質(zhì)細(xì)胞乳鐵蛋白的表達(dá)及其對(duì)腹側(cè)中腦神經(jīng)元的作用研究摘要帕金森病(Parkinson’Sdisease，PD)是一種常見(jiàn)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，l臨床表現(xiàn)主要有靜止性震顫、肌僵直、運(yùn)動(dòng)減少和姿勢(shì)反射障礙等癥狀。PD的神經(jīng)病理學(xué)基礎(chǔ)是黑質(zhì)致密帶(substantianigraparscompacta，SNpc)多巴胺(dopamine，DA)能神經(jīng)元的變性脫失以及由此而導(dǎo)致的紋狀體DA含量降低。PD的病因目前尚未完全明了，與遺傳因素、

2、環(huán)境因素、氧化應(yīng)激、興奮性毒素、自身免疫、黑質(zhì)(substantianigra，SN)鐵聚積和細(xì)胞凋亡等多種因素有關(guān)。PD患者的中腦SNpc有大量的激活的小膠質(zhì)細(xì)胞，這些激活的小膠質(zhì)細(xì)胞和殘存的DA能神經(jīng)元又有大量的鐵沉積，然而小膠質(zhì)細(xì)胞激活和鐵聚積之間的關(guān)系尚未闡明。乳鐵蛋白(1actoferrin，Lf)是一種鐵結(jié)合性糖蛋白，屬于轉(zhuǎn)鐵蛋白家族成員之一，由許多外分泌腺分泌，存在于人類和其他哺乳動(dòng)物的淚液、唾液、乳汁和嗜中性粒細(xì)胞中。乳

3、鐵蛋白受體(1actoferrinreceptor，LfR)廣泛存在于人體內(nèi)的不同組織和細(xì)胞類型中，其作用是通過(guò)受體介導(dǎo)的內(nèi)吞參與Lf內(nèi)化。Lf可以結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)三價(jià)鐵離子，是鐵在機(jī)體內(nèi)代謝及轉(zhuǎn)運(yùn)的關(guān)鍵載體。Lf還具有廣泛的生物學(xué)功能：抗氧化應(yīng)激，抗癌，調(diào)控免疫炎癥反應(yīng)等，可能與其鐵結(jié)合特性無(wú)關(guān)。在體內(nèi)Lf主要以兩種形式存在：不含鐵形式(apo1actoferrin，apoLf)和鐵飽和形式(holo—lactoferrin，holoLf)。

4、在腦內(nèi)只有激活的小膠質(zhì)細(xì)胞合成釋放LC1甲基_4一苯基1，2，3，6一四氫吡啶(1methyl4phenyll，2，3，6tetrahydropyridine，MPTP)模型小鼠中LfmRNA的表達(dá)水平升高。LfR主要在神經(jīng)元上表達(dá)，腦組織染色發(fā)現(xiàn)PD患者中腦的神經(jīng)元和微血管中LfR反應(yīng)性表達(dá)增加，提示Lf／LfR與PD鐵聚積和神經(jīng)元進(jìn)行性退化之間有一定關(guān)聯(lián)性。本研究應(yīng)用原代培養(yǎng)的大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞、腹側(cè)中腦神經(jīng)元及神經(jīng)毒素MPTP制各的P

5、D小鼠模型，采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、流式細(xì)胞儀技術(shù)、免疫熒光、免疫印跡、高效液相色譜法、激光共聚焦掃描技術(shù)等多項(xiàng)研究方法，探討了鐵對(duì)激活的小膠質(zhì)細(xì)胞合成釋放Lf的影響以及Lf對(duì)神經(jīng)毒素1一甲基4苯基吡啶陽(yáng)離子(1methyl4一phenylpyridiniumion，Mpp)損傷的腹側(cè)中腦神經(jīng)元及MPTP誘導(dǎo)的PD模型小鼠發(fā)揮保護(hù)作用的可能機(jī)制。結(jié)果如下：1100Imaol／LMPP或800ng／ml的脂多糖(1ipo

6、polysaccharide，LPS)處理原代培養(yǎng)的小膠質(zhì)細(xì)胞24h，Lf的釋放量顯著增]JI(P005)。100pmol／L的枸櫞酸鐵銨(ferricammoniumcitrate，F(xiàn)AC)預(yù)處理12h可顯著增加其釋放量，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P005)。lllillllllllllllllllllllMlllllnfY2589033物DOPAC、HVA的含量明顯降低，而經(jīng)Lf預(yù)處理以后可明顯拮抗上述變化。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究Lf合成釋放的影響