牛瑟氏泰勒蟲P23-33融合基因重組腺病毒的構(gòu)建及免疫學(xué)初步評價.pdf

1、牛瑟氏泰勒蟲病是由泰勒科、泰勒屬的瑟氏泰勒蟲（Theileria sergenti）寄生于牛體內(nèi)引起的以高熱、貧血、出血、消瘦和體表淋巴結(jié)腫大為主要臨床癥狀的一種血液原蟲病。近年來，牛瑟氏泰勒蟲病在我國的流行區(qū)域逐漸擴(kuò)大，發(fā)病率和死亡率也呈上升趨勢，已給養(yǎng)牛業(yè)帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，是威脅畜牧業(yè)健康發(fā)展的重要疫病之一。
　　牛瑟氏泰勒蟲P23、P33表面蛋白基因均具有較好的抗原性，在抗牛瑟氏泰勒蟲感染中起到重要作用。為更好的利用 P2

2、3和 P33表面蛋白，本研究以pMD18-T-P23-P33為模板，設(shè)計特異性引物，PCR擴(kuò)增牛瑟氏泰勒蟲P23-33融合基因，克隆、酶切P23-33融合基因后，亞克隆至腺病毒穿梭載體pCR259。將構(gòu)建的重組穿梭質(zhì)粒pCR259-P23-33轉(zhuǎn)化至含腺病毒骨架質(zhì)粒Transpose-Ad294的E.coli HighQ-1?感受態(tài)細(xì)胞中，經(jīng)同源重組獲得重組腺病毒質(zhì)粒pAd-P23-33。PCR、酶切鑒定正確后轉(zhuǎn)染HEK-293細(xì)胞，包

3、裝重組腺病毒，RT-PCR和IPMA檢測基因表達(dá)情況。測定病毒滴度后，免疫BALB/c小鼠，檢測血清中抗體水平和細(xì)胞因子IL-4、IFN-γ水平，評價重組腺病毒的免疫效果。
　　結(jié)果顯示，成功構(gòu)建含1135bp融合基因的重組腺病毒質(zhì)粒pAd-P23-33，經(jīng)RT-PCR和IPMA檢測融合基因在BHK293細(xì)胞中獲得表達(dá)，測定重組腺病毒滴度為6.3×107IU/ml。重組腺病毒 pAd-P23-33免疫 BALB/c小鼠后，血清中的