替米沙坦通過(guò)重塑RAS平衡及激活PPAR-γ雙信號(hào)通路改善高脂喂養(yǎng)小鼠的胰島功能.pdf

1、目的：
　　除了作為ARB外，替米沙坦尚具有部分激活PPAR-γ的能力。通過(guò)預(yù)防性應(yīng)用替米沙坦長(zhǎng)期干預(yù)高脂喂養(yǎng)小鼠，并用GW9662阻斷替米沙坦的PPAR-γ通路后觀察替米沙坦對(duì)高脂喂養(yǎng)小鼠胰島素敏感性、胰島功能、胰島形態(tài)結(jié)構(gòu)及胰島炎癥反應(yīng)作用的變化，進(jìn)一步探討替米沙坦是否通過(guò)重塑RAS平衡及激活PPAR-γ雙信號(hào)通路發(fā)揮對(duì)高脂喂養(yǎng)小鼠胰島功能的保護(hù)作用及其作用機(jī)制。
　　方法：
　　1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)；將28只8周齡雄性C

2、57BL/6J小鼠先以基礎(chǔ)飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，然后隨機(jī)分為正常對(duì)照組（LFD組，n=7），單純高脂飲食組（HFD組，n=7），其余14只小鼠均在高脂飼料喂養(yǎng)的同時(shí)給予替米沙坦（5mg/kg/d）灌胃。分別喂養(yǎng)4周后，開(kāi)始將替米沙坦干預(yù)的小鼠隨機(jī)分為替米沙坦+高脂喂養(yǎng)組（Telmi組，n=7）和替米沙坦+高脂喂養(yǎng)+GW9662組（GW9662組，n=7）。GW9662為PPAR-γ拮抗劑，注射劑量為10mg/kg/d，各組小鼠繼續(xù)喂養(yǎng)4周

3、。于第8周進(jìn)行腹腔葡萄糖耐量試驗(yàn)（IPGTT）、空腹血糖（FBG）、空腹胰島素（FPI）測(cè)定以評(píng)價(jià)胰島素抵抗及糖代謝；以免疫熒光技術(shù)或RT-PCR技術(shù)檢測(cè)胰島形態(tài)結(jié)構(gòu)、炎癥反應(yīng)、胰島細(xì)胞凋亡水平及胰島內(nèi)PPAR-γ的表達(dá)、β細(xì)胞功能標(biāo)記基因的表達(dá)，附睪脂肪組織PPAR-γ、RAS的表達(dá)。
　　2.離體胰島細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：對(duì)健康C57BL/6J小鼠進(jìn)項(xiàng)胰島分離及體外培養(yǎng)，在棕櫚酸溶液干預(yù)的基礎(chǔ)上用替米沙坦和（或）GW9662處理離體胰島，

4、分別為對(duì)照組（Con組）、單純棕櫚酸干預(yù)組（PA組）、棕櫚酸+替米沙坦組（Telmi組）、棕櫚酸+替米沙坦+GW9662組（GW9662組）。RT-PCR技術(shù)檢測(cè)離體胰島細(xì)胞炎癥因子及RAS成分的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.替米沙坦和（或）GW9662的干預(yù)對(duì)高脂喂養(yǎng)小鼠胰島素抵抗的效應(yīng)
　　與LFD組比較，HFD組IPGTT實(shí)驗(yàn)AUC顯著增加70.1％（P<0.05），F(xiàn)PG、FPI、HOMA-IR較LFD組顯著升高

5、（均P<0.05）；與HFD組相比,Telmi組上述各檢測(cè)指標(biāo)均顯著下降（均P<0.05）；阻斷PPAR-γ信號(hào)通路后，與Telmi組相比，GW9662組IPGTT實(shí)驗(yàn)AUC、FPI、HOMA-IR均顯著增加（均P<0.05），F(xiàn)PG有所升高（P>0.05），但明顯高于LFD組（P<0.05）。
　　2.替米沙坦和（或）GW9662的干預(yù)對(duì)高脂喂養(yǎng)小鼠胰島β細(xì)胞功能及胰島形態(tài)結(jié)構(gòu)的效應(yīng)
　　與LFD組比較，HFD組胰島β細(xì)胞

6、功能標(biāo)記基因Insulin、PDX1、GLUT2mRNA相對(duì)表達(dá)量分別降低47.6%、46.8%、61.3%（均P<0.05），胰島結(jié)構(gòu)散亂，胰島β細(xì)胞質(zhì)量、α細(xì)胞質(zhì)量、α/β細(xì)胞的比值均顯著增加（均p<0.05）。與HFD組相比,Telmi組胰腺β細(xì)胞功能性基因相對(duì)表達(dá)量顯著升高（均P<0.05）；胰島形態(tài)結(jié)構(gòu)趨于規(guī)則，α細(xì)胞質(zhì)量、α/β細(xì)胞的比例分別降低37.5%、43.4%（均p<0.05）。與Telmi組相比，GW9662組胰腺

7、β細(xì)胞功能性基因的表達(dá)下降（均P<0.05）；胰島結(jié)構(gòu)紊亂，α/β細(xì)胞的比例增加83.3%（p<0.05）。
　　3.替米沙坦和（或）GW9662的干預(yù)對(duì)高脂作用下胰島炎癥反應(yīng)及細(xì)胞凋亡的效應(yīng)
　　動(dòng)物實(shí)驗(yàn)與LFD組相比，HFD組胰島內(nèi)P65熒光染色區(qū)域增加，胰島內(nèi)活化型caspase-3陽(yáng)性的細(xì)胞質(zhì)量約增至LFD組的2.1倍（P<0.05）；較HFD組，Telmi組P65在胰島的表達(dá)顯著減弱；活化型caspase-3陽(yáng)性的

8、胰島細(xì)胞質(zhì)量降低38.4%（P<0.05）；較Telmi組，GW9662組胰島P65熒光染色區(qū)域增加，凋亡的胰島細(xì)胞質(zhì)量量顯著增加（均P<0.05）。
　　體外實(shí)驗(yàn)中與對(duì)照組（Con組）相比，單純棕櫚酸組(PA組)離體胰島細(xì)胞IL-1β及TNF-αmRNA相對(duì)表達(dá)水平上調(diào)（均P<0.05）；與PA組相比，替米沙坦+棕櫚酸干預(yù)組（Telmi組）胰島IL-1β、TNF-αmRNA相對(duì)表達(dá)量顯著減少56.2%、53.1%（均P<0.05

9、）；與Telmi組相比，GW9662組胰島炎癥因子表達(dá)水平顯著增加（均P<0.05）。
　　4.替米沙坦的干預(yù)對(duì)高脂作用下胰島及附睪脂肪組織PPAR-γ、RAS的效應(yīng)
　　動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中與LFD組相比，HFD組胰島及附睪脂肪組織PPAR-γmRNA相對(duì)表達(dá)量顯著下降（均P<0.05），附睪脂肪組織ACE、AT1RmRNA、ACE/ACE2相對(duì)值明顯上調(diào)（均P<0.05），ACE2mRNA水平明顯下降約62.3%（P<0.05）。

10、較HFD組，Telmi組附睪脂肪組織與胰島PPAR-γ表達(dá)上調(diào)（均P<0.05），附睪脂肪組織ACE、AT1RmRNA相對(duì)表達(dá)量明減少（均P<0.05），ACE2mRNA水平升高約3.1倍（P<0.05）。
　　體外實(shí)驗(yàn)中與Con組相比，PA組離體胰島細(xì)胞ACE、AT1RmRNA相對(duì)表達(dá)量、ACE/ACE2比值均顯著增加（均P<0.05），與PA組比較，Telmi組胰島細(xì)胞ACEmRNA、AT1RmRNA相對(duì)表達(dá)水平分別降低59.

11、6%、71.2%（P<0.05），ACE2mRNA相對(duì)表達(dá)量增加（P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　長(zhǎng)期高脂喂養(yǎng)誘導(dǎo)的胰島素抵抗小鼠出現(xiàn)胰島功能及形態(tài)結(jié)構(gòu)受損，胰島炎癥反應(yīng)及細(xì)胞凋亡，伴隨附睪脂肪組織及胰島RAS穩(wěn)態(tài)失衡，PPAR-γ表達(dá)下調(diào)。替米沙坦通過(guò)重塑局部組織RAS平衡（下調(diào)ACE、AT1RmRNA的表達(dá)，上調(diào)ACE2 mRNA的表達(dá)）及部分激活PPAR-γ雙信號(hào)通路發(fā)揮對(duì)高脂喂養(yǎng)小鼠胰島功能的保護(hù)作用，而該保護(hù)作用