5-Aza-CdR對(duì)EC9706細(xì)胞生物學(xué)行為及TFPI-2表達(dá)的影響.pdf

1、背景與目的:
　　 食管癌是一種常見(jiàn)的惡性腫瘤,其發(fā)生率和死亡率在我國(guó)居第4位。由于早期診斷不易,就診時(shí)70％～80％的患者已經(jīng)進(jìn)入臨床中晚期。手術(shù)治療曾經(jīng)被視作食管癌的標(biāo)準(zhǔn)治療方法,但即使是比較早期的病變,其術(shù)后復(fù)發(fā)率仍較高。目前,食管癌總的5年生存率約30％左右,療效亟待提高。近年來(lái),隨著臨床腫瘤學(xué)的快速發(fā)展,食管癌的綜合治療日漸突出,并已引起業(yè)內(nèi)重視,成為臨床研究一大熱點(diǎn)。食管癌的內(nèi)科治療目前仍停留在細(xì)胞毒藥物治療水平上。

2、因此尋找新的分子作用靶點(diǎn),發(fā)現(xiàn)新的靶向治療藥物具有重要的意義。
　　 組織因子途徑抑制物2(tissue factor pathway inhibitor,TFPI-2)又稱(chēng)胎盤(pán)蛋白-5(placental protein,PP),與TFPI是同系物,是Kunitz型絲氨酸蛋白酶抑制物家族的一個(gè)成員,它對(duì)包括基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)、胰蛋白酶、纖溶酶在內(nèi)的多種酶類(lèi)均有抑制作用

3、[1],而MMPs參與了細(xì)胞外基質(zhì)的重塑,同時(shí)它在纖維蛋白溶解、動(dòng)脈粥樣硬化、傷口愈合及腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移和血管新生等生理病理過(guò)程中都發(fā)揮著重要的作用。最近,TFPI-2基因被認(rèn)為是一個(gè)新的候選抑癌基因,越來(lái)越多的研究表明TFPI-2能明顯抑制腫瘤中MMPs的活性與功能,通過(guò)維持細(xì)胞外基質(zhì)的完整、調(diào)控腫瘤細(xì)胞的凋亡及調(diào)節(jié)腫瘤血管生成等機(jī)制來(lái)控制惡性腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。啟動(dòng)子區(qū)CpG島(CpGisland)高甲基化在腫瘤形成機(jī)制中的確切

4、作用我們尚不清楚,然而眾多證據(jù)表明,腫瘤抑癌基因CpG島異常的甲基化導(dǎo)致基因失活和轉(zhuǎn)錄抑制是腫瘤發(fā)生的重要機(jī)制之一[2-4]。CpG島的過(guò)甲基化是可逆的,通過(guò)人為或其他因素干預(yù)后,可使相關(guān)基因CpG島去甲基化而恢復(fù)其表達(dá),因此去甲基化治療可能成為T(mén)FPI-2表達(dá)陰性的食管癌治療的一條新思路。
　　 目前關(guān)于TFPI-2基因在食管癌中的表達(dá)情況的分析研究尚少,本實(shí)驗(yàn)的目的是探討5-氮雜-2-脫氧胞苷(5-Aza-2-deoxycy

5、tidine,5-Aza-CdR)干預(yù)對(duì)食管鱗癌細(xì)胞株EC9706生長(zhǎng)增殖及TFPI-2基因表達(dá)的影響,以探索TFPI-2基因的失活機(jī)制,同時(shí)尋找食管癌治療的新靶點(diǎn)。
　　 方法:
　　 選取食管鱗癌細(xì)胞株EC9706,并用不同濃度的5-Aza-CdR處理該細(xì)胞株。MTT法檢測(cè)干預(yù)前后細(xì)胞增長(zhǎng)率的變化,FCM法檢測(cè)干預(yù)前后細(xì)胞凋亡率的變化,RT—PCR技術(shù)檢測(cè)干預(yù)前后EC9706細(xì)胞TFPI-2基因mRNA的表達(dá),免疫組

6、化檢測(cè)干預(yù)前后EC9706細(xì)胞TFPI-2蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 食管鱗癌細(xì)胞株EC9706存在TFPI-2基因超甲基化,經(jīng)5-Aza-CdR處理后,細(xì)胞增殖受到抑制,細(xì)胞凋亡率明顯提高(P<0.05)；細(xì)胞中TFPI-2蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng),同時(shí)mRNA的表達(dá)水平也較處理前明顯提高(P<0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、TFPI-2抑癌基因的表達(dá)沉默與食管癌的發(fā)生相關(guān)；
　　 2、5-