泛酸激酶4基因?qū)功?細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、本工作旨在探討大鼠泛酸激酶4(rPanK4，rat pantothenate kinase 4)基因?qū)挂葝uβ-細(xì)胞凋亡的作用，并在基因轉(zhuǎn)錄、蛋白表達(dá)、蛋白活性水平三個(gè)層次，比較系統(tǒng)地綜合探討rPanK4抗凋亡的作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)室過去多年來對(duì)2型糖尿病發(fā)生的分子生物學(xué)機(jī)制的研究已取得了一定的進(jìn)展，從多方面驗(yàn)證了PanK4基因與2型糖尿病相關(guān)，并發(fā)現(xiàn)該基因是2型糖尿病的保護(hù)性因子。在本次研究中構(gòu)建了全長(zhǎng)rPanK4的真核表達(dá)載體，并轉(zhuǎn)入胰島

2、瘤細(xì)胞系RINm5F細(xì)胞中，構(gòu)建了穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株rPanK4-RINm5F。在加入2.5mg/ml凋亡誘導(dǎo)劑STZ作用24小時(shí)后，穩(wěn)定表達(dá)rPanK4的RINm5F細(xì)胞相比起未轉(zhuǎn)染的RINm5F細(xì)胞凋亡率有了明顯的下降。定量real-time PCR的結(jié)果顯示，rPanK4明顯抑制了procaspase-9的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平，但對(duì)Bcl-2，Bax，Bad，procaspase-3，and procaspase-8的轉(zhuǎn)錄沒有影響。這種作用與

3、葡萄糖的刺激無關(guān)。由于procaspase-9轉(zhuǎn)錄水平的下降進(jìn)而抑制了procaspase-9的蛋白表達(dá)水平，同時(shí)，rPanK4不會(huì)影響procaspase-3的蛋白表達(dá)水平。在加入凋亡誘導(dǎo)劑作用后，caspase-9的活性隨其蛋白表達(dá)水平的下降而降低，由于caspase-9是caspase-3的直接激活物，caspase-3的活性也出現(xiàn)了明顯的降低。對(duì)caspase-9的上游激活物胞漿內(nèi)細(xì)胞色素C的含量進(jìn)行檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，caspase-