小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中巨噬細胞炎性蛋白-1α的表達及其與損傷時間的關(guān)系.pdf

1、目的：創(chuàng)傷愈合是一個包括損傷組織炎癥反應(yīng)，增生增殖和成熟階段的一個復(fù)雜生物學反應(yīng)。許多不同種類的生物物質(zhì)與創(chuàng)傷愈合的各個階段比如促進炎癥反應(yīng)，肉芽組織的生成以及血管反應(yīng)等密切相關(guān)。在法醫(yī)病理學中，這些生物物質(zhì)在皮膚損傷中的表達可以用于損傷時間的推測。趨化性細胞因子又稱趨化因子，它們參與白細胞遷移、激活和趨化，在炎癥反應(yīng)中起核心作用。MIP-1α屬趨化因子CC亞族，分子量為8KD。MIP-1α可在不同因素刺激下被細菌，病毒及IL-1、TN

2、F-α等炎性細胞因子誘導產(chǎn)生，據(jù)報道細胞來源的MIP-1α可由單核/巨噬細胞、中性粒細胞、成纖維細胞、內(nèi)皮細胞、及某些腫瘤細胞等多種細胞產(chǎn)生。MIP-1α的靶細胞有單核細胞、中性粒細胞、酸性粒細胞、NK細胞、樹突狀細胞等，其通過受體介導與靶細胞結(jié)合發(fā)揮生物學活性.MIP-1α與其受體結(jié)合后，有趨化免疫細胞、抑制造血干細胞生長及抑制HIV感染的作用。目前國內(nèi)外對MIP-1α研究多集中在臨床領(lǐng)域，而在法醫(yī)學領(lǐng)域的研究較少，尤其是國內(nèi)對MIP

3、-1α在皮膚機械性損傷修復(fù)時間的推斷方面幾乎未見報道。本研究通過建立小鼠皮膚切創(chuàng)損傷模型，運用免疫組化技術(shù)及其陽性細胞計數(shù)法對損傷組織進行MIP-1α的檢測與分析，探討在皮膚創(chuàng)傷愈合過程中其表達的時序性變化規(guī)律，以便為法醫(yī)病理學損傷時間的推斷提供一個新的理論依據(jù)。 方法：采用完全隨機分組方法，分為實驗組和對照組。實驗組又分為生前造創(chuàng)組和死后造創(chuàng)組，生前造創(chuàng)組根據(jù)造創(chuàng)后處死時間不同將實驗小鼠隨機分為傷后1h、3h、6h、12h、1

4、d、3d、6d、10d、14d共9組，死后造創(chuàng)組分為0.5h，1h，3h，6h共4組；另設(shè)一組為正常對照組，即未造創(chuàng)組。生前造創(chuàng)組在小鼠背部制做全層切創(chuàng)，在預(yù)定時間分別斷頸處死后即刻取材，死后造創(chuàng)組于處死小鼠后在預(yù)定時間造創(chuàng)取材，應(yīng)用免疫組織化學技術(shù)及陽性細胞計數(shù)法觀察傷后小鼠切創(chuàng)組織中不同時程的生前傷和死后傷皮膚創(chuàng)傷局部MIP-1α的表達，并和無切創(chuàng)的小鼠作為對照，探討MIP-1α在小鼠皮膚切創(chuàng)損傷愈合過程中的表達分布變化規(guī)律及其與損

5、傷時間的關(guān)系。 結(jié)果：1、HE染色觀察：傷后1d內(nèi)，可見大量炎性細胞游出，主要以中性粒細胞浸潤為主；傷后3～6d，肉芽組織逐漸形成并大量增生，炎性細胞以單核-巨噬細胞為主；傷后10～14d，肉芽組織逐漸成熟，炎性細胞消失，創(chuàng)口基本愈合。死后造創(chuàng)組及正常對照組鏡下無上述改變。2、免疫組化SABC法染色觀察：傷后1d內(nèi)，MIP-1α在大量浸潤的中性粒細胞中呈陽性染色及在單核細胞中呈散在陽性表達；傷后3d，MIP-1α在逐漸形成并大量

6、增生的肉芽組織中呈陽性染色，其主要在大量的單核細胞內(nèi)表達并在開始增生的成纖維細胞內(nèi)表達；其后到14d MIP-1α陽性表達在部分成纖維細胞內(nèi)，但染色范圍和強度明顯減弱。死后造創(chuàng)組(0.5h，1h組)及正常對照組在部分表皮細胞及毛囊等表達弱陽性，死后造創(chuàng)3h,6h組表達陰性。3、陽性細胞計數(shù)法結(jié)果：陽性細胞率(PR值)在傷后6h到傷后3d逐漸上升，傷后3d達到高峰，傷后10～14d，PR值逐漸下降。4、統(tǒng)計學處理結(jié)果：方差分析結(jié)果表明生前

7、創(chuàng)傷各相鄰兩組之間：MIP-1α PR值相比均具有顯著差異(P＜0.01)。其中生前創(chuàng)傷3d組與其他各時間組相比均有顯著差異(P＜0.01)。 結(jié)論： 1、生前造創(chuàng)組MIP-1α在炎癥細胞中的表達量的變化具有規(guī)律性，呈現(xiàn)出升高期.高峰期.下降期的時序性變化曲線，其中造創(chuàng)后3d達到表達最高峰。2、MIP-1α表達陽性細胞的變化具有規(guī)律性，呈現(xiàn)出早期以中性粒細胞為主，高峰期以單核.巨噬細胞為主，后期以部分成纖維細胞表達為主的動態(tài)變化