PTA1（CD226）分子配體的研究.pdf

1、血小板/T活化抗原1（Platelet and T cell activation antigen 1,PTA1）是1997年基因克隆成分的一個新分子,并在2000年第七屆國際人類白細胞分化抗原協(xié)作組大會上給予了新的CD編號為CD226.該文的目的就是鑒定PTA1L,為最終克隆PTA1L,全面了解PTA1-PTA1L的生理、病理功能及其介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)打下基礎(chǔ).為此,我們首先純化了抗人PTA1單克隆抗體（mAb）LeoA1,并制備成親和層

2、析柱,以此為工具從穩(wěn)定表達PTA1/Ig融合蛋白的中國倉鼠卵母細胞系（CHO）培養(yǎng)上清中大量純化PTA1/Ig融合蛋白.采用間接免疫熒光染色,對多種細胞系進行流式細胞術(shù)分析并觀察PTA1L的分布發(fā)現(xiàn),PTA1L的分布及表達水平隨細胞系的不同而變化,以人內(nèi)皮細胞系ECV304細胞表達水平最高,達67.8﹪.通過流式細胞術(shù)觀察了系列抗人PTA1mAbs對PTA1/Ig融合蛋白與ECV304細胞結(jié)合的阻斷作用,結(jié)果發(fā)現(xiàn)LeoA1能夠完全阻斷P

3、TA1與其配體的結(jié)合,提示LeoA1所識別的PTA1抗原表位可能是其與配體結(jié)合或靠近的功能表位.為了確定PTA1L的分子量,我們采用生物素標記技術(shù),對高水平表達PTA1L的ECV304細胞進行了生物素標記,經(jīng)Protein-A及人IgG1預(yù)清除后,采用PTA1/Ig融合蛋白進行免疫沉淀,通過Western-Blot檢測發(fā)現(xiàn),PTA1L可能為一分子量大于220kD的蛋白.該研究的結(jié)果為進一步克隆PTA1L、全面了解PTA1-PTA1L的功