ING4基因在腫瘤發(fā)生中的檢測及其慢病毒載體構建.pdf

1、目的:觀察ING4基因在腫瘤發(fā)生中轉錄水平的變化和突變情況；克隆人骨髓間質干細胞ING4(inhibitor of growth famility,member4)基因，改造慢病毒表達載體并構建ING4基因慢病毒表達載體PNL-ING4. 結果:RT-PCR表明在LTEP-a-2、SW480、LSC、Hela、PC3、F6、GC-MSC、hBM-MSC、UVEC-304、急性淋巴細胞白血病(ALL)和慢性粒細胞白血病(CML)患

2、者骨髓中有不同水平ING4基因表達，其中LSC、ALL和CML患者骨髓中表達量較低，而在A549和胃癌患者癌組織中表達量極低。定量PCR顯示，ING4基因在A549、LTEP-a-2，SW480，GC-MSC，PC3，Hela．UVEC-304，hBM-MSC和F6中均有表達，表達量以A549最低，F(xiàn)6最高，而UVEC-304和hBM-MSC居中。全長測序顯示，在hBM-MSC第七代和第九代、LSC、SW480、F6、CML患者骨髓中均

3、發(fā)現(xiàn)缺失及錯配，缺失大部分發(fā)生在NLS域內，錯義突變和移碼突變也有發(fā)現(xiàn)。且隨著骨髓問質干細胞傳代數(shù)目的增多，點突變和缺失的頻率也越來越高。從hBM-MSC中克隆ING4基因全長并改造慢病毒表達載體PNL-ires，構建了PNL-ING4慢病毒表達載體，雙酶切和基因測序正確。包裝293T細胞后可見綠色熒光，轉染效率可達80％以上，并可檢測出ING4基因的表達。 結論:ING4基因在不同腫瘤細胞中呈不同水平的表達，部分表現(xiàn)出表達產物