鴿Ⅰ型副粘病毒JSG-4分離株生物學(xué)特性與免疫原性研究.pdf

1、鴿1型副粘病毒病(PigeonParamyxovirus-1,PPMV-1)，又稱鴿瘟，是由新城疫病毒引發(fā)的鴿的一種急性傳染病。該病流行期長(zhǎng)，發(fā)病率和死亡率高，以下痢和神經(jīng)癥狀為主要特征，是當(dāng)前養(yǎng)鴿業(yè)發(fā)展的主要難題。不僅給養(yǎng)禽業(yè)帶來(lái)了重大損失，而且給我國(guó)的禽產(chǎn)品出口設(shè)置了商業(yè)壁壘。國(guó)際獸疫局(OIE)將其列入A類病。近二十年來(lái)，由于疫苗的廣泛使用，新城疫已由過(guò)去大面積的爆發(fā)變成了現(xiàn)在的零星散發(fā)，相應(yīng)的癥狀也由過(guò)去的典型變成非典型。由于P

2、PMV-1對(duì)鴿有很強(qiáng)的致病性，且PPMV-1變異極快，用NDV疫苗不能產(chǎn)生完全有效的保護(hù)，在一些免疫或非免疫場(chǎng)新城疫仍時(shí)有發(fā)生。根據(jù)PPMV-1對(duì)鴿和雞致病性的不同，我們將其大致分為3種類型：第1種為對(duì)鴿致病而對(duì)雞不致病的鴿中強(qiáng)毒株或較弱毒株，此類是引起亞、歐鴿群廣泛流行的病原體；第2種為對(duì)鴿和雞都致病的強(qiáng)毒株；第3種為對(duì)幼鴿和雛雞均不致病的弱毒株和無(wú)毒株。目前我國(guó)存在的鴿源基因型包括Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ三型。本研究通過(guò)對(duì)JSG-4分離株的系列生

3、物學(xué)特性測(cè)定，序列分析以及免疫原性實(shí)驗(yàn)，以期為鴿1型副粘病毒分子流行病學(xué)調(diào)查和預(yù)防PPMV-1的發(fā)生作出貢獻(xiàn)。 我們從南京某養(yǎng)鴿場(chǎng)疑似患鴿瘟的病鴿腦內(nèi)分離到一株病毒，命名為JSG-4株。通過(guò)對(duì)其進(jìn)行負(fù)染透射電鏡形態(tài)學(xué)觀察，SPF雞胚接種試驗(yàn)，分離株HA及NDV血清HI試驗(yàn)，動(dòng)物回歸試驗(yàn)，MDT、ICPI和IVPI、EID50毒力學(xué)指標(biāo)測(cè)定。結(jié)果表明：該分離株電鏡下圓形，有纖突，直徑200nm-300nm，似副粘病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)；盲

4、傳三代后分離株HA為81og2，能被NDVLasota株陽(yáng)性血清中和；MDT為63h、ICPI為1.09、IVPI為0.43、ELD50為10-7.66/0.1ml；動(dòng)物回歸試驗(yàn)鴿出現(xiàn)典型的新城疫癥狀，而雞不發(fā)病，僅能通過(guò)HI檢測(cè)到新城疫抗體。證明該分離株為鴿1型副粘病毒毒株。 為了進(jìn)一步了解JSG-4病毒分離株的相關(guān)分子生物學(xué)情況，參考已發(fā)表的禽Ⅰ型副粘病毒F、HN蛋白核酸序列，合成了三對(duì)引物，經(jīng)RT-PCR擴(kuò)增、定向克隆到p

5、MD18-T質(zhì)粒載體，測(cè)定其核酸序列，并分析比較JSG-4株F基因核酸序列與其它參考毒株之間的同源性，以F蛋白核苷酸序列繪制系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。結(jié)果表明：JSG-4株的F基因ORF全長(zhǎng)1662bp，編碼553個(gè)氨基酸；HN基因ORF全長(zhǎng)1734bp，編碼577個(gè)氨基酸；JSG-4株與LaSota同源性最高，達(dá)到98.8％；本實(shí)驗(yàn)中的JSG-4分離株F0蛋白裂解位點(diǎn)的氨基酸組成為：112G-R-Q-G-R-L117；并確定JSG-4株屬于基因Ⅱ型