白細胞介素2基因佐劑對捻轉血矛線蟲H11核酸疫苗的免疫增強作用.pdf

1、捻轉血矛線蟲(Haemonchus contortus)是羊(山羊、綿羊)的主要胃腸道寄生蟲之一，常常導致羊特別是羔羊貧血、消瘦、甚至死亡，造成重大經濟損失。目前的主要防治方法是使用抗蠕蟲藥，但由于蟲體抗藥性的產生和蔓延、藥物殘留和研制新抗蟲藥的巨額花費，使得捻轉血矛線蟲病的免疫預防成為當前的迫切需要。 Hll是一種隱蔽抗原，分布于成蟲階段蟲體的小腸微絨毛上皮細胞。研究資料表明Hll具有良好的免疫保護效果，天然Hll具有良好的免

2、疫保護作用，免疫動物后，可使蟲卵減少90％，成蟲減少70％，是優(yōu)良的基因工程疫苗候選抗原，國外已在GenBank中注冊了該抗原基因的全序列，本實驗室利用分子克隆的手段，成功構建了捻轉血矛線蟲Hll抗原的核酸疫苗，并取得了明顯的保護效果。lL-2是T細胞分泌的細胞因子之一，具有廣泛的生物學功能，不僅可以促進T、B細胞、NK細胞、單核細胞的分裂增殖，還可促進其它細胞因子如干擾素的分泌，增強抗原提呈作用，是調節(jié)機體免疫的重要因子。為了進一步提

3、高Hll核酸疫苗的保護水平，本研究將山羊白細胞介素2(Interleukin-2)作為基因佐劑與HllDNA疫苗共同免疫動物，以期獲得更好的免疫保護效果。本實驗主要包括以下幾個部分： 核酸疫苗pcDNA4.0-IL-2-Hll-1，2，3的構建和鑒定 利用DNA重組技術，將IL-2基因分別串聯于Hll基因的上游，通過酶切、序列測定等方法鑒定正確后，分別用重組質粒免疫8-10月齡山羊，1周后取注射部位肌肉組織，用RT-PC

4、R，Western-blot方法檢測抗原的轉錄和表達情況。結果顯示該Hll基因和山羊IL-2基因均能在注射部位肌肉中表達。 核酸疫苗pcDNA4.0-IL-2-Hll-1，2，3的免疫保護實驗 pcDNA4.0-IL-2-Hll-1，2，3和pcDNA4-0-Hll-1，2，3分別于0天和14天腿部肌肉免疫山羊，劑量為每一種疫苗100ug，同時設立不免疫不攻蟲(陰性對照組)和只攻蟲不免疫組(陽性對照組)，初免后28天用5

5、，000條捻轉血矛線蟲三期幼蟲攻蟲，通過對初免后14、28、31、36、46、56、66天IgG、IgA抗體的檢測，發(fā)現免疫組比對照組均能產生較高的抗體水平，說明核酸疫苗能夠誘導機體產生較強的體液免疫水平；利用流氏細胞儀測定技術，對免疫前、初免后14、28、66天各組CD4+、CD8+T細胞和B淋巴細胞的檢測，發(fā)現核酸疫苗免疫組均能誘導動物機體產生較高的細胞免疫水平，尤其是pcDNA4.0-IL-2-H11-1，2，3免疫組，CD4＋、

6、CD8＋T細胞的水平在免疫后更高；另外，本實驗還對實驗動物外周血中各種血細胞的含量變化進行了檢測，包括嗜酸性粒細胞計數，嗜堿性粒細胞計數，嗜中性粒細胞計數，單核細胞計數,淋巴細胞計數，血紅蛋白計數，白細胞計數。結果進一步說明核酸疫苗對實驗動物具有良好的保護效果。攻蟲以后，直腸采集糞便，進行蟲卵計數和蟲卵孵化，結果發(fā)現，與陽性對照組相比，pcDNA4.0-IL-2-H11-1，2，3免疫組蟲卵減少56.6％，pcDNA4.0-H11-1，