人可溶性Flt3配體的基因工程生產(chǎn)、生物學(xué)活性及抗輻射作用的研究.pdf

1、 為獲得高效表達(dá)人可溶性FL(rhFL)的表達(dá)菌株，生產(chǎn)具有生物學(xué)功能的rhFL，并研究rhFL在機(jī)體輻射防護(hù)中的作用，我們應(yīng)用畢氏酵母(Pichiapastoris)表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)rhFL，經(jīng)分離純化后，對其體外生物學(xué)活性進(jìn)行了一系列研究，并就其在體內(nèi)、外的輻射防護(hù)作用及其機(jī)制進(jìn)行了探索。 本文第一部分研究了rhFL的基因克隆、表達(dá)、分離及純化。應(yīng)用全自動發(fā)酵裝置進(jìn)行發(fā)酵，獲得30mg/L表達(dá)上清的表達(dá)蛋白，并進(jìn)行了rhF

2、L的分離、純化，獲得純度達(dá)95﹪以上的重組蛋白。經(jīng)體外生物學(xué)活性測定，證實(shí)具有較好的生物學(xué)作用。 本文第二部分研究了rhFL對正常造血的作用。研究結(jié)果表明，rhFL對造血系統(tǒng)不但具有直接作用(刺激造血集落的形成和樹突狀細(xì)胞的發(fā)育)，而且具有間接作用(通過刺激造血基質(zhì)細(xì)胞-內(nèi)皮細(xì)胞來實(shí)現(xiàn))。 本文第三部分研究了rhFL對白血病細(xì)胞的作用。造血系統(tǒng)多種惡性腫瘤起源于造血前體細(xì)胞，這些細(xì)胞是否表達(dá)Flt3R，F(xiàn)L對其有無刺激作

3、用，這關(guān)系到FL能否用于該類患者造血功能嚴(yán)重衰竭時(shí)的治療，亦關(guān)系到FL能否用于此類患者的抗腫瘤生物治療?！　”狙芯扛鶕?jù)FL對正常NK細(xì)胞、DC的刺激作用及其在免疫系統(tǒng)造血過程中的重要功能，研究了FL對受照射外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)中淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞組分的影響。rhFL還可有效地協(xié)同TNFα+GM-CSF+IL-4，自受照射的PBMC中誘導(dǎo)產(chǎn)生DC。rhFL對DC的刺激增殖作用，有可能使機(jī)體在輻射后對易于侵入的各種病原菌產(chǎn)生有效的